在培養各種細胞時,細胞培養瓶是使用頻率比較高的一種細胞培養耗材,它多用于貼壁細胞的培養,規格從25ml-225ml不等。倉鼠腎細胞培養液會選用這種耗材,其培養的具體步驟如下:
T75細胞培養瓶
1、細胞培養前期準備工作:
1)準備MEM培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗1%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
T225細胞培養瓶
2、細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的細胞培養瓶中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
三角細胞搖瓶
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
以上是在細胞培養瓶內培養倉鼠腎細胞的具體步驟。此外,細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml。
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