手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
1.瓊脂糖凝膠電泳后無PCR擴增產物條帶
主要表現：Marker及對照條帶均正常，但檢測樣本無條帶。
原因分析：1.反應條件不合適：PCR過程中退火溫度過高，退火延伸時間不足，反應循環數過少。
2.核酸模板濃度或純度低：普通PCR的檢測敏感度有限，樣本核酸含量低或者含有抑制物。
3.反應體系與核酸擴增不匹配：檢測體系中的Mg2+濃度，dNTPs量或Buffer與目標核酸擴增所需條件不匹配。
4.引物設計不當或者發生降解：存在引物二聚體或二級結構，引物稀釋后未分裝儲存條件不適宜或者反復凍融次數過多。
解決方案：1.優化反應條件，梯度摸索退火溫度，延長退火延伸時間，增加反應循環數（30-45區間為宜）。
2.對核酸模板進行純化，或使用商業化核酸提取試劑盒進行提取，增加核酸模板的上樣量。
3.優化反應體系（預混體系除外），改變檢測體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。
4.重新設計引物，避免引物二聚體和鏈內二級結構，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復凍融次數。
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心