使用目的:
本試劑盒用于測定植物樣本中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)的含量。
實驗原理
本試劑盒應用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)水平。用純化的大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中
加入大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin),和 HRP 標記的大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)抗原, 使它們競爭結合,,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的大豆β-
伴球蛋白(β-conglycinin)的含量呈負相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值), 通過標準曲線計算樣品中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)的含量。
標本要求
1.標本處理:(1)水樣采集后經(jīng) -20℃反復凍融三次,再經(jīng)玻璃纖維過濾后,備查(2)組織樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相關文獻提取進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 加樣:分別設標準孔、空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加 50 微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
6. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色215 分鐘.
7. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
檢測范圍:
10 μg/ml -4800 μg/ml
規(guī)格:
96 人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月
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