細菌內毒素檢測（BET，Bacterial Endotoxins Testing）的創新技術問世后，證明平臺間檢測的等效性就變得至關重要。“Sievers^® Eclipse比例確認測試”旨在確認使用96孔板時的樣品與鱟試劑的1:1比例始終對使用Eclipse微孔板也同樣有效。只要保持1:1比例，就能使樣品和鱟試劑（LAL，LimulusAmoebocyte Lysate，鱟變形細胞溶解物）之間的生物化學反應保持不變。即使在使用Sievers Eclipse平臺時減少光學孔的總容積，每個孔中的1:1比例也能保持不變，用戶可以確信樣品和標準品的內毒素測量值是準確有效的。

使用96孔板的動態顯色法細菌內毒素檢測技術，要求在每個孔中加注標準品或樣品與鱟試劑的混合液，然后觀察液體的顏色變化。檢測成功的關鍵在于精確控制樣品和鱟試劑的用量。USP <85>規定，對于某些檢測參數（例如體積比、反應起效時間、pH值等），應遵循鱟試劑生產商提供的使用說明（IFU，Instructions for Use）。

有的使用說明指示用戶準備1:1樣品與鱟試劑混合液時，建議使用100 µL（而非典型的200 µL）作為孔的總容積，并指出100 µL有助于達到最佳的檢測靈敏度。該使用說明表明，1:1的比例關系（而非孔的總容積）才是檢測成功的關鍵。只要每個孔中的樣品和鱟試劑的比例是1:1，反應就能準確進行，產生的結果就是等效的。

如果比例不是1:1，那么樣品與鱟試劑的用量就不對，就會對反應動力學過程和整體檢測結果產生顯著影響。除了孔的總容積之外，還需考慮反應速度。如果反應較快，那么起始反應時間就較短，內毒素濃度就較高。如果反應較慢，則情況相反——起始反應時間較長，內毒素濃度較低。

錯誤的比例還會影響鱟試劑在與樣品混合時的自然緩沖能力。如果達不到1:1的精確比例，則反應混合液的pH值就不在建議的6-8范圍之內，就會影響檢測的整體反應動力學過程。

1:1比例確認測試旨在證明在Sievers Eclipse微孔板的104個孔中都達到了鱟試劑和樣品的1:1精確比例。進行測試時，用戶需要一個新的Sievers Eclipse微孔板和Sievers Eclipse 1:1比例確認套件，該套件包括一個水瓶和一個染色劑瓶。開始分析之前，Eclipse軟件會指導用戶在對應的位置和鱟試劑LAL端口，完成水和染色劑的準備和注射。然后，Eclipse微孔板按照正常分析時的步驟運行。1:1比例確認測試不依賴于動力學酶促反應，因此測試所需的總時間較短。

分析完畢后，Eclipse軟件的“1:1比例結果（1:1 Ratio Results）”選項卡中會顯示報告。報告內容除了包括在運行測試之前輸入的常規信息（例如分析儀序列號、Eclipse微孔板信息、1:1比例確認樣品信息），還包括104個光學孔的各自的平均光密度。

Sievers Eclipse微孔板是精密設計的微流控液體處理設備。此款微孔板利用計量分配腔，以恒定的通道幾何形狀和運動方式，將精確等量的樣品和鱟試劑同時送到光學孔中。正是Eclipse微孔板的精密的液體控制能力，確保了每次檢測的所有104個光學孔中都達到樣品與鱟試劑的1:1關鍵性比例。

鱟試劑生產商提供的使用說明可能會直接表明1:1比例，也可能會指導用戶混合一定量的樣品和鱟試劑，但液體總體積未必一定是200 µL。如果光路徑較長，或者為了進行精確移液，生產商會建議設置較大容積，以提高檢測精度。對于標準的96孔微孔板來說，建議設置的孔的總容積在75-200 µL范圍內。“為了進行有效測量，建議設置的微孔板的最小孔容積通常大于最大孔容積的1/3。”¹ 所以，每次檢測的每個孔中的樣品與鱟試劑的比例達到1:1，非常重要，而沒有必要使用整個孔的容積。

在Sievers Eclipse平臺上進行1:1比例確認測試的結果證明，即使孔的總容積顯著減小，每次檢測的每個光學孔中都能達到至關重要的1:1比例。始終保持1:1的精確比例，用戶就能確認在轉換平臺時，生物化學過程是等效的。建議每年由Sievers分析儀認證的現場服務工程師或代表來完成此項確認測試任務。