關(guān)鍵詞：菌種傳代 菌種資源 科研 工業(yè)生產(chǎn) 遺傳特性 初級細(xì)胞庫 主細(xì)胞庫 工作細(xì)胞庫 傳代次數(shù) 菌種培養(yǎng) 菌種保存 無菌操作

菌種傳代是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中一項(xiàng)基礎(chǔ)且關(guān)鍵的操作，旨在通過連續(xù)培養(yǎng)將微生物菌種從一代轉(zhuǎn)移到下一代，以維持其生命活力、遺傳特性及實(shí)驗(yàn)所需的生理狀態(tài)。此過程對于菌種保藏、遺傳學(xué)研究、藥物篩選、發(fā)酵工藝開發(fā)等多個領(lǐng)域至關(guān)重要。菌種傳代技術(shù)不僅是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵操作，更是保障菌種資源可持續(xù)利用的重要手段。通過精細(xì)的傳代管理與保藏策略，可以確保菌種資源的豐富性、多樣性和穩(wěn)定性，為微生物學(xué)及相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展提供有力支撐。

一、菌種傳代的定義與意義

定義：菌種傳代是指將已有的純種菌株在新鮮培養(yǎng)基上進(jìn)行繁殖，使其生長分裂成新的菌種，并保持其遺傳特性的操作。培養(yǎng)基可以為固體、液體或半固體，根據(jù)不同菌種選擇合適的培養(yǎng)基。

意義：菌種傳代對于保持微生物的純度和遺傳特性、維持微生物活力、保藏菌種資源至關(guān)重要。隨著微生物學(xué)的發(fā)展，菌種傳代對于科學(xué)研究、工業(yè)生產(chǎn)以及生物安全和環(huán)境保護(hù)都具有重要意義。

二、菌種分類

1.初級細(xì)胞庫：又名原始細(xì)胞庫，經(jīng)鑒定可以用于科研或工作生產(chǎn)，并由原始細(xì)胞分裂生長形成的均一穩(wěn)定的細(xì)胞群體，用于建立主細(xì)胞庫。

2.主細(xì)胞庫：經(jīng)原始細(xì)胞庫傳代增殖后形成的細(xì)胞群體，用于建立工作細(xì)胞庫。主細(xì)胞庫的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)高于初級細(xì)胞庫。生產(chǎn)企業(yè)的主細(xì)胞庫傳代次數(shù)最多不得超過兩代。

3.工作細(xì)胞庫：經(jīng)主細(xì)胞庫細(xì)胞傳代增殖，達(dá)到一定代次水平的細(xì)胞群體。工作細(xì)胞庫一般分裝于冷凍管中，于超低溫冰箱（-80℃）或液氮中冷凍保存。工作細(xì)胞庫復(fù)蘇后的傳代次數(shù)應(yīng)不超過批準(zhǔn)的該細(xì)胞用于生產(chǎn)的最高傳代次數(shù)，最高傳代次數(shù)應(yīng)根據(jù)研究結(jié)果確定，不得超過國際認(rèn)可的最高傳代次數(shù)。生產(chǎn)企業(yè)的工作細(xì)胞庫必須限定為一代。《中國藥典》2020年版規(guī)定，試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為第0代）。

三、菌種傳代的操作步驟

1.準(zhǔn)備：根據(jù)不同的菌種選擇合適的培養(yǎng)基，如瓊脂或液體培養(yǎng)基。

2.傳代：以瓊脂培養(yǎng)基為例：準(zhǔn)備好用于傳代的冷凍管，無菌條件下用無菌水將冷凍管稀釋至培養(yǎng)需要的濃度，用吸管吸取適量菌懸液加入培養(yǎng)基中，均勻涂布，動作應(yīng)輕緩。操作結(jié)束后將培養(yǎng)基密封包扎，放于恒溫培養(yǎng)間中培養(yǎng)。

3.觀察：定時(shí)觀察記錄菌種在培養(yǎng)基上的生長情況，如菌落形態(tài)、顏色和密度等。

4.保存：培養(yǎng)周期結(jié)束后將合格的菌種培養(yǎng)基裝袋放于冷藏冰箱中保存，用于科研或工業(yè)生產(chǎn)。

5.維持傳代：重復(fù)上述步驟，將菌種傳代到新的培養(yǎng)基上，以保持其遺傳特性。注意傳代次數(shù)不得超過規(guī)定的最高傳代次數(shù)。

四、菌種傳代的注意事項(xiàng)

1.無菌操作：在菌種傳代過程中，應(yīng)保持無菌操作，避免外來雜菌的污染。

2.控制傳代次數(shù)：實(shí)驗(yàn)室使用的工作菌種一般不可超過5代，防止過度傳代造成菌種變異。

3.定期檢查：定期對保存的菌種進(jìn)行檢查，確保其純度和活性。超出保存周期的菌種培養(yǎng)基應(yīng)及時(shí)銷毀，不宜繼續(xù)使用。

4.妥善保存：日常使用菌種應(yīng)冷藏保存，工作細(xì)胞庫應(yīng)冷凍保存。保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應(yīng)有專用的冰箱，并上鎖管理。

五、菌種傳代的應(yīng)用

菌種傳代在工業(yè)生產(chǎn)、科學(xué)研究以及生物安全和環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。在發(fā)酵工業(yè)中，菌種傳代與保藏是確保生產(chǎn)過程的穩(wěn)定性和產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)；在科學(xué)研究領(lǐng)域，菌種傳代是基因工程、蛋白質(zhì)工程、酶工程等研究的基礎(chǔ)；在生物安全和環(huán)境保護(hù)方面，菌種傳代有助于防止病原菌的傳播和擴(kuò)散，保障人類和動物的安全。