摘要本研究展示了一種比較品牌和仿制非處方 (OTC) 對乙酰氨基酚藥物中相關(guān)雜質(zhì)的方法。該工作流程包括 Agilent InfinityLab 液相色譜/質(zhì)譜選擇性檢測器 (LC/MSD iQ) 和Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)。本研究鑒定的雜質(zhì)濃度低于使用 UV 能夠可靠檢出的濃度。

前言多數(shù) OTC 藥物都是根據(jù)品牌產(chǎn)品開發(fā)的仿制藥，無需處方即可購買。這些仿制藥由不同的制造商出售，有助于刺激競爭并降低價格，使患者更容易負(fù)擔(dān)。仿制OTC 藥品生產(chǎn)企業(yè)必須滿足與 USFDA 針對已批準(zhǔn)品牌藥確定的規(guī)格、純度、穩(wěn)定性和相關(guān)雜質(zhì)限度等相同的質(zhì)量屬性[1]。仿制藥品制造商必須能夠表征其產(chǎn)品及其雜質(zhì)，通常使用 HPLC 和 UV 檢測。添加質(zhì)量選擇檢測器可以大大縮短典型 USP或 EP 方法的分析時間[2]，因?yàn)楣蚕疵摻M分可以由目標(biāo)化合物的質(zhì)量明確地確定。本研究對比了對乙酰氨基酚品牌藥和仿制OTC 藥中的相關(guān)雜質(zhì)。使用 InfinityLabLC/MSD iQ 和 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)篩查雜質(zhì)。基于單四極桿技術(shù)的LC/MSD iQ 是一款強(qiáng)大耐用的檢測系統(tǒng)，其設(shè)計(jì)重點(diǎn)是簡單易用性和可靠性。這是一款直觀的儀器，只需極少的用戶培訓(xùn)。它可以采用高液相色譜流速，并能自動優(yōu)化 MS 參數(shù)，以提供最佳結(jié)果。使用質(zhì)譜檢測能夠確保對活性藥物成分(API) 及其相關(guān)雜質(zhì)，以及更為重要的任何未知或意外雜質(zhì)進(jìn)行明確檢測。色譜工作人員可以輕松地將 LC/MSD iQ 作為新模塊加入現(xiàn)有液相色譜堆棧中。此款儀器經(jīng)過專門設(shè)計(jì)，可以輕松集成到Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)、1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)甚至更舊型號的液相色譜系統(tǒng)中，其空間設(shè)計(jì)可插入與液相色譜模塊相同的電源插座中。包括 MS 和真空泵在內(nèi)的 HPLC 堆棧可置于Agilent InfinityLab Flex Bench MS 移動支架上，從而節(jié)省了工作臺空間，并可快速安全地移動整個系統(tǒng)。

實(shí)驗(yàn)部分標(biāo)準(zhǔn)品與化學(xué)品所有試劑和溶劑均為 HPLC 或 LC/MS級。甲醇購自 Honeywell (Morristown,NJ, USA)。對乙酰氨基酚 API 其相關(guān)雜質(zhì)和乙酸的標(biāo)準(zhǔn)品購自 Millipore-Sigma(Merck, Darmstadt, Germany)。超純水產(chǎn)自采用 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式終端過濾器濾芯的 Milli-Q Integral 系統(tǒng)(EMD Millipore, Billerica, MA, USA)。OTC 藥品樣品購自當(dāng)?shù)厮幍辏放飘a(chǎn)品為藥品 1，仿制產(chǎn)品為藥品 2。

儀器LC/MSD iQ 系統(tǒng)包括以下模塊：• Agilent 1290 Infinity II 高速泵(G7120A)• Agilent 1290 Infinity II 樣品瓶進(jìn)樣器(G7129B)• Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱(G7116B)• Agilent 1290 Infinity II 二極管陣列檢測器 (G7117B)• Agilent LC/MSD iQ (G6160AA)將 DAD 與 60 mm 安捷倫最大光強(qiáng)卡套式流通池 (G4212-60007) 配套使用，以使LC/MSD iQ 的 UV 檢測獲得最大靈敏度。 

樣品前處理將選定藥物雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品稱量至 15 mLFalcon 管中，用甲醇稀釋至 1 mg/mL 的工作濃度，然后超聲處理約 15 分鐘。將100 µL 每種標(biāo)準(zhǔn)品加入 2 mL 螺口樣品瓶中，并用 80:20 甲醇/水稀釋至 1 mL。用 80:20 甲醇/水進(jìn)行連續(xù)稀釋，以制備以下外部校準(zhǔn)曲線的濃度：10、5、2.5、1、0.5 和 0.1 µg/mL。OTC 藥物樣品為片劑，每片對乙酰氨基酚 (API) 劑量為 500 mg。使用甲醇對 API 及其雜質(zhì)進(jìn)行簡單的液相萃取。將藥物片劑置于包含 10 mL 甲醇的 15 mL Falcon 管中，振蕩 30 分鐘，超聲處理約 30 分鐘，然后以 4500 rpm 的轉(zhuǎn)速在離心機(jī)中離心約 15 分鐘。然后，從 Falcon 管中吸取1 mL 最終溶液到 2 mL 螺口樣品瓶中進(jìn)行分析，最終 API 濃度為 50 mg/mL。

Agilent OpenLab CDS使用 Agilent OpenLab CDS 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集、處理和報告。OpenLab CDS 提供法規(guī)認(rèn)證功能，可根據(jù)美國 FDA 21 CFRPart 11、歐盟附錄 11 及其他類似法規(guī)提供數(shù)據(jù)可靠性支持。1290 Infinity II LC 和LC/MSD iQ 旨在確保 GxP 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)應(yīng)用中可靠且穩(wěn)定的 LC/MS 分析。

……

結(jié)論Agilent LC/MSD iQ 可以輕松檢出 OTC 藥品中存在的低至皮克級柱上量 (ng/mL)的雜質(zhì)。分析品牌和仿制 OTC 藥中的雜質(zhì)，并進(jìn)行對比。該品牌藥含有四種可檢出雜質(zhì)：4-氨基苯酚、RC-A、RC-B 和 RC-D，而仿制藥含三種可檢出雜質(zhì)：4-氨基苯酚、RC-A 和 RC-B。即使對品牌藥的分析顯示存在更多檢出雜質(zhì)，但仿制藥中這些雜質(zhì)的濃度更高。兩種 OTC 產(chǎn)品均按照 USFDA 指南[3] 生產(chǎn)，且雜質(zhì)濃度遠(yuǎn)低于指南中規(guī)定的濃度：15 µg/mL 或 0.03% API。在這些濃度下（參見表 4），UV 檢測器無法可靠地定量這些雜質(zhì)。此外，在兩種 API 之間觀察到的雜質(zhì)譜差異可以歸因于原材料來源以及制造過程中使用的合成和純化工藝差異。