類固醇激素，又稱甾體激素，調節人體多種機能，在臨床診斷發揮著重要的作用。在前面的推文中，我們已經分享過一種關于臨床檢測中19種類固醇激素的反相SPE前處理及相應的LC-MS/MS分析方案，這周我們為大家分享另一種前處理方案：固相支撐液液萃取（Solid-Supported Liquid Extraction, SLE）方法在其中的應用。

SLE操作步驟如下：

PS: pre-spiked samples

PoS: post-spiked samples

圖6 Kinetex C18分離類固醇相關異構體總離子流圖

圖7 部分化合物標準曲線

表6 標準曲線，LLOQ和S/N結果匯總

圖8 部分化合物LLOQ限度譜圖示例

表7 回收率及準確度結果

表8 精密度，基質效應和方法回收率結果

Kinetex 2.6µm C18色譜柱在正離子和負離子模式下在8min內實現了對類固醇相關異構體的良好分離（圖6）。使用二氯甲烷洗脫時，除17羥基孕烯醇酮和DHEAS外，其他組分線性良好，R2>0.99；當使用乙酸乙酯洗脫時，所有組分R2>0.98（圖7、表6）。對于準確度而言，使用二氯甲烷洗脫時，除17羥基孕烯醇酮和DHEAS外都在80%~112%之間，而使用乙酸乙酯洗脫時候，所有組分準確度都在91%~118%之間（表7）。

此外，使用二氯甲烷洗脫時，回收率在13%~87%之間（表7），其中18羥基皮質酮（13%）、醛固酮（21%）、孕酮（28%）、皮質醇（24%）和可的松（52%）回收率均較低。在使用乙酸乙酯洗脫時，除DHEAS外，所有組分回收率均在84%~110%之間。本次研究中發現DHEAS在SLE方法下基本無回收，建議使用反相SPE方式進行前處理。

本方案中所開發的SLE方法簡便有效可重復性強，所用到Novum PRO SLE, MAX 96孔板可實現快速、高通量的樣品前處理。分析中用到的Kinetex 2.6µm C18色譜柱也可在8分鐘內對相關類固醇化合物進行有效分離，實現LC-MS/MS方法的準確定量。