目前，市面上關(guān)于實(shí)驗(yàn)中消除生物樣品自體熒光的使用方法有很多，比如化學(xué)交聯(lián)固定誘導(dǎo)的自發(fā)熒光、圖像處理技術(shù)、光譜掃描和熒光團(tuán)選擇 、使用新型熒光探針等，那關(guān)于自體熒光您了解哪些？

什么是自體熒光？

生物體內(nèi)的一些內(nèi)源性物質(zhì)（天然存在的分子）在沒(méi)有添加外來(lái)熒光染料的情況下，受到特定波長(zhǎng)的光激發(fā)后，自身能發(fā)出熒光的現(xiàn)象。

自體熒光的信號(hào)通常來(lái)源：

01. 脂褐素：是細(xì)胞內(nèi)的一種脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的氧化聚合產(chǎn)物，常見于衰老細(xì)胞。其熒光強(qiáng)度可以作為細(xì)胞衰老程度的一個(gè)標(biāo)志。

02. 彈性纖維：主要存在于有彈性的組織中，像皮膚、血管、肺部等組織中，增強(qiáng)組織的彈性和韌性。

03. 維生素A：本身一般沒(méi)有自體熒光，但在固定或免疫熒光染色時(shí)，會(huì)與其它物質(zhì)相互作用，產(chǎn)生干擾熒光成像的信號(hào)。

04. NADH：細(xì)胞呼吸過(guò)程中的關(guān)鍵輔酶，參與細(xì)胞的能量代謝。如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞等需要高能量的細(xì)胞。

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自體熒光有哪些影響？

在實(shí)際應(yīng)用中，自體熒光現(xiàn)象會(huì)干擾目標(biāo)熒光信號(hào)的觀察，對(duì)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)一些影響：

01. 影響成像：自體熒光會(huì)增加背景噪聲，這可能會(huì)掩蓋微弱的信號(hào)，降低實(shí)驗(yàn)的信噪比。

02. 非特異性染色：在組織免疫熒光等實(shí)驗(yàn)中，自體熒光可能導(dǎo)致非特異性染色，影響對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確解釋。

03. 通道干擾：在多色流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)中，自體熒光可能會(huì)在不同通道間產(chǎn)生干擾，使得數(shù)據(jù)分析復(fù)雜化。

04. 樣品制備問(wèn)題：塑料容器、培養(yǎng)基添加劑、紙質(zhì)標(biāo)簽等實(shí)驗(yàn)室常用物品也可能產(chǎn)生自體熒光，這些都需要在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)予以考慮。

05. 固定和染色過(guò)程：使用醛類固定劑或某些染料可能增加樣品的自體熒光。

常見的熒光淬滅方法

1.熒光淬滅試劑

◎ 常用的減少自體熒光的方法

◎ 缺點(diǎn)：

1. 會(huì)減弱實(shí)驗(yàn)中原本想要檢測(cè)的熒光染料的信號(hào)。這意味著，雖然自體熒光被減少，但目標(biāo)信號(hào)也可能受損。

2. 會(huì)引入非特異性背景熒光，即在其它熒光波長(zhǎng)處增加噪聲，而干擾目標(biāo)信號(hào)的檢測(cè)和分析。

3. 只適合單一免疫熒光染色

4. 只適合已經(jīng)固定在載玻片上的組織切片

2.強(qiáng)光照射（LED/UV）

◎不使用化學(xué)試劑的自體熒光淬滅方法

◎缺點(diǎn)：

1.淬滅效率低。需要長(zhǎng)時(shí)間照射（幾個(gè)小時(shí)到幾天）才能完成所有載玻片上組織的自體熒光淬滅。

2.組織會(huì)因長(zhǎng)時(shí)間光照射導(dǎo)致高水平的熱損傷，影響樣品的生物結(jié)構(gòu)和功能，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.推薦使用TiYO™ 自體熒光淬滅系統(tǒng)

艾貝泰代理的TiYO™ 自體熒光淬滅系統(tǒng)采用光漂白LED技術(shù)，強(qiáng)力淬滅自體熒光，大幅提高信噪比，呈現(xiàn)清晰無(wú)比的熒光圖像，無(wú)需復(fù)雜程序和試劑，一步淬滅組織切片的自體熒光。特別適用于處理高度自發(fā)熒光的樣本。

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