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Chondrex公司提供一系列用于蛋白質(zhì)純化的填料樹脂。Chondrex總結(jié)了下面不同蛋白純化方法，以幫助您選擇合適的填料樹脂來純化目的蛋白。如需購買Chondrex公司產(chǎn)品，咨詢產(chǎn)品技術(shù)問題，請聯(lián)系Chondrex授權(quán)代理商欣博盛生物。
1.離子交換色譜法(1，2)
●. 每個蛋白質(zhì)都帶有凈電荷，故蛋白質(zhì)具有等電點(pI)，等電點由蛋白質(zhì)的一級氨基酸序列決定。這種帶電性質(zhì)允許蛋白質(zhì)在離子交換色譜中選擇性地與帶相反電荷的填料樹脂結(jié)合。這項技術(shù)利用了帶正電荷的樹脂(陰離子交換:DEAE和Q)，或帶負(fù)電荷的樹脂(陽離子交換:CM)。然后，pH或鹽梯度的改變會促使蛋白質(zhì)從填料樹脂中的被洗脫下來。
2.親和層析(3)
●. 親和層析是通過生物分子間強而可逆的相互結(jié)合的方式來純化特定蛋白質(zhì)的高效方法，這種方法在色譜填料樹脂上固定了一種可以與其他蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，允許通過改變條件，如pH或鹽濃度，選擇性結(jié)合某種目標(biāo)蛋白并隨后洗脫該目標(biāo)蛋白。
蛋白純化填料樹脂
離子交換純化 | 抗體親和純化 | His-tag蛋白親和純化 | |
Ligand or Chemistry (Catalog #) | DEAE: 9079 (5 ml) Q:9081 (5 ml) CM: 9080 (5 ml) | Protein A:9076 (1 ml) Protein G:9077 (1 ml) | Ni-IMAC:9078 (5 ml) |
Base Support | DEAE:Highly cross-linked 6% Sepharose Q:Highly cross-linked 6% Sepharose CM:Highly cross-linked 6% Sepharose | Protein A: Rigid, highly crosslinked Agarose Protein G: Highly cross-linked 4% Sepharose | Highly cross-linked 6% Sepharose |
Formats | A drip column / column chromatography | A drip column / column chromatography | A drip column / column chromatography |
Binding Capacity (mg/ml) | DEAE: Weak anion exchange 110-160 μmol Cl- /ml media
Q: Strong anion exchange 180-250 μmol Cl- /ml media
CM: Weak cation exchange 90-130 μmol H+/ml media | Protein A: 60 mg (human IgG)/ml media
Protein G: ≥ 20 mg (human IgG/ml media | ≥ 40 mg (His-tag protein)/ml media
16-23 μmol (Ni2+) /ml media |
Equivalent Products | DEAE Sepharose 4FF Q Sepharose 4FF CM Sepharose 4FF | MabSelect sure LX Protein G Sepharose 4FF | Ni Sepharose 4FF |
Protein A/G對不同物種免疫球蛋白類型的親和力
●. Protein A和Protein G對各種免疫球蛋白(Ig)亞型、亞類和物種表現(xiàn)出特異性親和力,這種親和力由Ig Fc區(qū)的特性決定。Chondrex在下表中列出了不同物種間Protein A和Protein G與免疫球蛋白亞類的相互作用強度。
物種 | 免疫球蛋白類型 | 與Protein A結(jié)合 | 與Protein G結(jié)合 |
Human | IgG(normal) | ++++ | ++++ |
IgG1 | ++++ | ++++ | |
IgG2 | ++++ | ++++ | |
IgG3 | - | ++++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | |
IgM | - | - | |
IgA | - | - | |
IgE | - | - | |
Mouse | IgG1 | + | ++++ |
IgG2a | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | |
Rat | IgG1 | - | + |
IgG2a | - | ++++ | |
IgG2b | - | ++ | |
IgG2c | + | ++ | |
Goat | IgG | +/- | ++ |
Rabbit | IgG | ++++ | +++ |
Sheep | IgG | +/- | ++ |
“-”:No binding，”+”:Weak binding，“++”:Binding，”+++”:Moderate Binding，”++++”:Strong Binding
參考文獻：
●. P.M.Cummins.K. D.Rochfort. B.F.O'Connor, lon-Exchange Chromatography: Basic Principles and Application.Methods Mol.Biol.1485,209-223(2017).
●. A.Jungbauer,R.Hahn,"Chapter 22 lon-Exchange Chromatography" in Methods in Enzymology, R.R.Burgess, Deutscher, Murray P., Eds.(Academic Press,2009)vol.463,pp.349-371.
●. M.Urh, D.Simpson, K.Zhao, Affinity chromatography: general methods. Methods Enzymol. 463,417-438(2009)
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