培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料,一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素。按所用原料不同,可分為兩類:應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配制的,稱為天然培養基;應用化學藥品配成并標明成分的,稱為合成培養基或綜合培養基。化學試劑中的培養基,大多為合成培養基。由于液體培養基不易長期保管,現在均改制成粉末。培養基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在2~6。C的冰箱內。
培養基的種類:
化學分類:
①天然培養基
指用化學成分不明確的天然物質做成的培養基,如雞的肝臟研磨液、人的血漿。
②組合培養基
又稱為合成培養基或綜合培養基,是一類按微生物的營養要求精確設計后用多種高純化學試劑配制成的培養基。如葡萄糖銨鹽培養基、淀粉硝酸鹽培養基等。
③半組合培養基
指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。
物理分類:
①液體培養基
80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。
②固體培養基
一類配制成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。
③半固體培養基
指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態的培養基。
④脫水培養基
又稱預制干燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。
微生物分類:
①選擇性培養基:一類根據某微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基,具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌的功能,廣泛用于菌種篩選等領域。
②鑒別培養基:一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產物發生顯色反應的指示劑,從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養基。例如,伊紅美藍乳糖培養基(EMB)。
培養基注意事項:
確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。
其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。
另外,應將有毒區與無毒區嚴格分開,并有各自獨立的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。
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