細胞凋亡檢測試劑盒基于細胞凋亡過程中的特定生物化學變化,通過特定的標記物或染料來區分活細胞、凋亡細胞和死細胞。其原理主要利用凋亡細胞有的生物化學特征,如細胞膜磷脂酰絲氨酸(PS)的外翻、DNA的斷裂以及線粒體膜電位的改變等。
細胞凋亡檢測試劑盒常用試劑盒類型:
Annexin V/PI檢測試劑盒:
原理:正常細胞中,PS只分布在細胞膜脂質雙層的內側。細胞發生凋亡最早期,PS由內側翻向外側,這一變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現象。Annexin V與PS有高度親和力,因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。PI是一種核酸染料,不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此,將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。
類型:根據熒光基團的不同,Annexin V/PI檢測試劑盒可分為多種類型,如Annexin V-FITC/PI、Annexin V-APC/PI等。其中,Annexin V-FITC/PI適用于細胞沒有自發熒光的情況;而Annexin V-APC/PI則適用于細胞本身需要檢測綠色熒光的情況。但需要注意的是,APC和PI的熒光光譜有較大重疊,對檢測儀器和技術人員有較高要求。
TUNEL細胞凋亡試劑盒:
原理:細胞發生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA,產生大量的粘性3'-OH末端。3'-OH可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的催化作用下,與熒光染料結合,從而通過熒光顯微鏡或流式細胞儀直接進行凋亡細胞的檢測。
應用:TUNEL細胞凋亡試劑盒可用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可檢測培養的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。
Caspase 3/7活性檢測試劑盒:
原理:Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族,其中Caspase 3是哺乳動物細胞中研究最多的caspase。Caspase 3/7可以催化底物產生黃色的熒光產物,通過測定熒光產物的吸光度來檢測Caspase 3/7的活性。
應用:Caspase 3/7活性檢測試劑盒可用于檢測細胞或組織裂解液中Caspase 3/7的活性,從而反映細胞凋亡的情況。
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