精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>其他文章>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

免疫熒光技術實驗步驟與優缺點

來源:上海撫生實業有限公司   2024年12月24日 14:42  

免疫熒光技術(Immunofluorescence,IF)又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。它是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質和定位。

原理:免疫熒光技術是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素,制成熒光抗體,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢測組織或細胞內的相應抗原(或抗體)。在組織或細胞內形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受外來激發光的照射而發生明亮的熒光(黃綠色或橘紅色),可以看見熒光所在的組織細胞,從而確定抗原或抗體的性質、定位,以及利用定量技術測定含量。

QQ20241224-143749.jpg


一、操作步驟:

1、細胞準備:對單層生長細胞,在傳代培養時,將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中,待細胞接近長成單層后取出蓋玻片,PBS洗兩次;對懸浮生長細胞,取對數生長細胞,用PBS離心洗滌(1000rpm,5min)2次,用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。

1、固定:根據需要選擇適當的固定劑固定細胞。固定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5 min.

2、通透:使用交聯劑(如多聚甲醛)固定后的細胞,一般需要在加入抗體孵育前,對細胞進行通透處理,以保證抗體能夠到達抗原部位。選擇通透劑應充分考慮抗原蛋白的性質。通透的時間一般在5-15min.通透后用PBS洗滌3×5 min.

3、封閉:使用封閉液對細胞進行封閉,時間一般為30min.

4、一抗結合:室溫孵育1h或者4℃過夜。PBST漂洗3次,每次沖洗5min.

5、二抗結合:間接免疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次沖洗5min后,再用蒸餾水漂洗一次。

二、優缺點:

優點:

  1、高靈敏度:免疫熒光技術對抗原的檢測具有很高的靈敏度,即使在極微量的抗原存在下也能進行檢測。

  2、高特異性:由于抗體與抗原的特異性結合,免疫熒光技術可以準確地定位和檢測特定的蛋白質或抗原。

  3、可視化:該技術允許直接在細胞或組織中觀察靶標抗原,提供了直觀的視覺信息,有利于了解抗原的分布和定位。

  4、雙重標記:可以同時使用兩種不同的熒光標記抗體,以在同一樣本中檢測兩種不同的抗原,這對于共定位研究非常有用。

  5、適用性廣:免疫熒光技術廣泛應用于生物學和醫學研究,包括疾病診斷、細胞分選、蛋白質相互作用和細胞生物學研究。

  6、可定量:通過測量熒光強度,可以對抗原表達進行定量分析。

  7、快速:一旦制備好樣品和抗體,免疫熒光實驗通常可以在幾小時內完成。

缺點:

  1、信號衰減:熒光信號會隨時間衰減,尤其是在長時間曝光于激發光下,這要求在實驗過程中及時捕獲圖像。

  2、非特異性背景:可能會發生非特異性結合,需要通過適當的封閉和對照實驗來減少背景信號。

  3、熒光淬滅:在某些條件下,熒光標記可能會淬滅,影響結果的可靠性。

  4、需要特殊設備:免疫熒光顯微鏡和相關設備相對昂貴,可能不是所有實驗室都能配備。

  5、樣品制備:樣品固定和處理過程可能影響抗原的檢測,需要仔細優化條件。

  6、不能保存長久:由于熒光信號會隨時間衰減,因此無法長期保存樣品進行復查。

  7、有限的多重分析能力:盡管可以進行雙重或多重標記,但可用的熒光通道數量有限,這限制了同時檢測不同抗原的數量。

  8、解釋主觀性:結果的解釋可能具有主觀性,依賴于觀察者對熒光信號的識別和解釋。

  9、光毒性:長時間的光照可能對活細胞造成損傷,影響細胞生理狀態。

 

 


免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 久久永久免费观看| 国产真实老熟女无套内射| 极品美女aⅴ高清| 亚洲精品另类| 国产中文字幕视频在线观看| 国产三级视频不卡在线观看| 亚洲成a∧人片在线观看无码| 囯产愉拍亚洲精品一区| 国产卡二区三卡乱码| 三级网站国产精品一区二区三区| 特级毛片片A片AAAAAA| 成人午夜AV亚洲精品无码网站| 欧美日韩综合一二三区| 国产不卡视频在线观看| 91香蕉视频在线播放| 精品一区二区成人在线| 亚洲五月花| 2024国产精品手机在线观看| 国产精品日本无码久久一老A| 少妇无码在线观看| 四虎影视永久在线观看| 成人精品视频在线| 久热国产精品视频| 午夜视频在线播放| 自拍亚洲欧美| 国产女同玩sm调教在线观看| 无码人妻国产一区二区三区| 亚洲午夜无码久久久久蜜臀av| 成熟女人性满足视频| 乱欧美式忌禁仑片国产精品| 日日爱66.com| 一级a性色生活片久久无少妇一级| 国产人妖在线精品不卡av| 色窝窝论坛| 美女扒开胸罩露出奶头的图片| av一区二区三区四区| 久久精品色婷婷国产福利| 亚洲午夜高清| 成人网站图片| 国产v片在线播放免费观| 女人下边被添全过程A片图片|