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常規(guī)理化檢測方法:提取劑的選擇及樣品預(yù)處理!

來源:北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司   2025年01月06日 14:50  

百歐博偉生物:食品中脂肪的存在形式有游離態(tài)的,也有結(jié)合態(tài)的。游離態(tài)的脂如動物性脂肪和植物性脂肪。結(jié)合態(tài)的脂如天然存在的磷脂、糖脂、脂蛋白等中的脂肪與蛋白質(zhì)或碳水化合物等成分形成的結(jié)合態(tài)。對大多數(shù)食品來說,游離態(tài)的脂肪是主要的,結(jié)合態(tài)的脂肪含量較少。

 

一、提取劑的選擇

 

脂類的結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,到現(xiàn)在沒有一種溶劑能將純脂肪萃取出來,也就是說提取出來的都是粗脂肪。(大部分是脂肪,還有一些其他成分)。

 

前面講性質(zhì)時(shí)講到,脂類不溶于水,易溶于有機(jī)溶劑。測定脂類大多采用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑。常用的溶劑有石油醚、氯仿—甲醇混合溶劑。其中溶解脂肪的能力強(qiáng),應(yīng)用泛。下面我們講他們的特點(diǎn):

 

(非極性)的優(yōu)缺點(diǎn)

 

1、優(yōu)點(diǎn)

 

1) 的沸點(diǎn)低為34.6℃

 

2) 溶劑脂肪能力強(qiáng)大于石油醚

 

2、缺點(diǎn)

 

1)能被2%的水飽和

 

2)含水的抽提能力降低(氧與水能形成氫鍵使穿透組織能力降低,即抽提能力下降)

 

3)含水的乙醇是非脂成分溶解,而被抽提出來,使結(jié)果偏高(糖蛋白質(zhì)等)

 

4)使結(jié)果偏高,而且易燃。

 

下面我們有一組試驗(yàn),通過實(shí)驗(yàn)我們可以比較一下結(jié)果

 

提取卵磷脂    25℃           mg / 100g

 

低分子成分    無水     含水

 

葡萄糖        10.5mg/100g    315mg/100g

 

蔗糖          15mg/100g      150mg/100g

 

絲氨酸        0              15mg/100g

 

NaCl          0              25mg/100g

 

由此可見,乙醇含水后,能將樣品中非脂成分溶解增加結(jié)果的重量,因此,使用時(shí),樣品不能含水分,必須干燥。而且使用時(shí)室內(nèi)需空氣流暢。因?yàn)樵诳諝庵校试S濃度為400ppm,超過這個(gè)極限易爆炸。

 

另外一般貯存在棕色瓶中放置一段時(shí)間后,光下照射就會產(chǎn)生過氧化物,過氧化物也容易爆炸,如果貯存時(shí)間過長,在使用前一定要檢查有無過氧化物,如果有應(yīng)當(dāng)除掉。

 

3、檢查過氧化物的方法

 

+少量的Fe2++少量KCNS待到紅色出現(xiàn) ,說明有過氧化物存在,反之為無色,排除過氧化物的方法如下。

 

4、排除過氧化物的方法

 

含過氧化物+FeSO4(少量) ------ 可除掉過氧化物

 

石油醚

 

石油醚溶解脂肪的能力比弱些,但吸收水分比少。沒有易燃。使用時(shí)允許樣品含有微量水分,它沒有膠溶現(xiàn)象,不會夾帶膠溶淀粉、蛋白質(zhì)等物質(zhì)。采用石油醚提取劑,測定值比較接近真實(shí)值。

 

對于石油醚這兩種溶劑適用于已烘干磨碎樣品,不易潮解結(jié)塊的樣品,而且只能提取樣品種中游離態(tài)的脂肪,不能提取結(jié)合態(tài)的脂肪,對于結(jié)合態(tài)脂,必須預(yù)先用酸或堿破壞脂類和非脂成分的結(jié)合后才能提取。有時(shí)利用兩種溶劑的優(yōu)點(diǎn),常常混合使用。

 

氯仿-甲醇

 

氯仿-甲醇是另一種有效的溶劑,它對于脂蛋白,磷脂的提取效率較高,特別適用于水產(chǎn)品、家禽、蛋制品等食品脂肪的提取。

 

二、樣品的預(yù)處理

 

樣品的預(yù)處理方法決定于樣品本身的性質(zhì),牛乳預(yù)處理非常簡單,而植物和動物組織的處理方法較為復(fù)雜。

 

1、粉碎

 

粉碎的方法很多,不論是切碎、碾磨、絞碎或者采用均質(zhì)等處理方法,應(yīng)當(dāng)使樣品中脂類物理、化學(xué)以及酶的降解都要減小到最小程度。

 

2、加海砂

 

有的樣品易結(jié)塊,用提取較困難,為了使樣品保持散粒狀可以加一些海砂,一般加樣品的4-6倍量(目的使樣品疏松,這樣擴(kuò)大了與有機(jī)溶劑的接觸面積,有利于萃取)。

 

3、加入無水硫酸鈉

 

因?yàn)榭杀?/span>2%水飽和,使不能滲入到組織內(nèi)部抽提脂肪的能力降低,所以有些樣品含水量高時(shí)可加入無水硫酸鈉,用量以樣品呈散粒狀為止。

 

4、干燥

 

干燥的目的:提高脂肪的提取效率。

 

干燥時(shí)要注意溫度:溫度過高(1)脂肪氧化(2)脂肪與糖、蛋白質(zhì)結(jié)合變成復(fù)合脂;溫度過低:脂肪易降解

 

5、酸處理

 

溫度過高時(shí)脂與糖、蛋白質(zhì)等接觸,變成復(fù)合脂,產(chǎn)生復(fù)合脂后,不能用外極性溶劑直接抽提,所以要用酸處理,主要是把結(jié)合脂肪水解出去,下面有個(gè)實(shí)驗(yàn)大家看一下:

 

面包:采用直接萃取 1.20% 脂肪,酸處理后萃取 1.73%脂肪

 

干全蛋:采用直接萃取 36.74% 脂肪,酸處理后萃取 42.39%脂肪

 

從這個(gè)實(shí)驗(yàn)可以看出,變成復(fù)合脂類,利用直接萃取得到的結(jié)果偏低,經(jīng)過酸水解將使蛋白質(zhì),碳水化合物與脂肪分開,這樣是脂肪游離出來后,再提取得到的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。

 

6、對有些樣品還有大量的碳水化合物,測定脂肪時(shí)應(yīng)先用水洗掉水溶性碳水化合物再進(jìn)行干燥、提取。

 

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