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肽聚糖(胞壁素)ELISA試劑盒:助力微生物感染診斷與研究

來源:武漢艾美捷科技有限公司   2025年01月06日 16:15  

肽聚糖(粘肽)ELISA試劑盒是一種用于體外定量測量生物樣本中肽聚糖濃度的ELISA試劑盒。目前處于開發階段。

 

艾美捷肽聚糖(胞壁素)ELISA試劑盒

貨號:abx585338

靶標:肽聚糖(粘肽)

反應性:通用(所有物種)

檢測應用:ELISA

推薦稀釋度:最終用戶應確定最佳稀釋度/濃度。

儲存:運輸時溫度為4°C。收到后,請按照試劑盒說明書中的儲存說明進行儲存。

有效期:該試劑盒的有效期至少為6個月。根據要求可提供長達12個月的有效期。

穩定性:試劑盒的穩定性由活性損失率決定。在適當的儲存條件下,有效期內的損失率小于5%。為了盡量減少性能波動,操作程序和實驗室條件應嚴格控制。還強烈建議整個檢測過程由同一位用戶完成。

檢測范圍:1.23 ng/ml - 100 ng/ml

靈敏度:< 0.51 ng/ml

標準品形式:凍干

檢測方法:比色法

檢測類型:競爭法

檢測數據:定量

樣本類型:生物樣本。

靶標類型:抗原

檢測原理:該試劑盒基于競爭酶聯免疫吸附試驗技術。96孔板上預先包被有抗體。將標準品、測試樣本和生物素偶聯試劑加入到孔中并孵育。生物素標記的粘肽和未標記的粘肽在預包被抗體上發生競爭抑制反應。然后加入HRP偶聯試劑,并將整個板孵育。在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結合的偶聯物。使用TMB底物來定量HRP酶促反應。加入TMB底物后,只有含有足夠粘肽的孔才會產生藍色產物,加入酸性終止液后變為黃色。黃色的強度與板上結合的粘肽量成反比。在微孔板讀數儀中以450 nm波長光譜光度法測量OD,從而可以計算出粘肽的濃度。

試劑盒組成:列出的試劑盒組成僅供參考。產品說明書可能略有不同。產品應按照隨產品一起提供的產品說明書中的說明使用。

預包被的96孔微孔板

標準品

標準品稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑A

檢測試劑B

稀釋液A

稀釋液B

TMB底物

終止液

板封膜

 

所需但未提供的材料:

37°C培養箱

多通道和單通道移液管及無菌移液槍頭

噴霧瓶或自動微孔板洗滌器

1.5 ml

蒸餾水

吸水濾紙

100 ml1升量筒

微孔板讀數儀(波長:450 nm

ELISA振蕩器

 

試劑準備:此程序僅供參考。

標準品:用推薦體積的標準品稀釋緩沖液制備標準品溶液。然后按照協議中的指示,用標準品稀釋緩沖液對標準品溶液進行系列稀釋。

洗滌緩沖液:按照協議中的指示,用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

檢測試劑準備:計算所需的工作溶液的總體積。分別用稀釋液A和稀釋液B將檢測試劑A和檢測試劑B稀釋1:100

檢測程序:此程序僅供參考。產品說明書可能略有不同。產品應按照隨產品一起提供的產品說明書中的說明使用。

設置標準品、測試樣本和對照孔。

50 µl稀釋后的標準品加入到標準品孔中。

50 µl標準品稀釋緩沖液加入到對照(零)孔中。

50 µl稀釋后的樣本加入到樣本孔中。

立即向每個孔中加入50 µl檢測試劑A。在37°C下孵育1小時。

洗滌3次。

向每個孔中加入100 µl檢測試劑B。在37°C下孵育30分鐘。

洗滌5次。

向每個孔中加入90 µl TMB底物。在37°C下孵育10-20分鐘。

加入50 µl終止液。

450 nm處測量OD

協議:此程序僅供參考。產品說明書可能略有不同。產品應按照隨產品一起提供的產品說明書中的說明使用。 在使用前將試劑盒組分和樣本平衡至室溫(18 - 25 °C)。建議每次測試繪制標準曲線。

在預包被板上分別設置標準品、測試樣本和對照(零)孔,然后記錄它們的位置。建議每個標準品和樣本至少重復測量兩次。

50 µL的每個標準品、對照和樣本加入到相應的孔中。

移除蓋子并丟棄液體。

立即加入50 µl檢測試劑A工作溶液。用蓋子封住板,在37°C下孵育1小時。

移除蓋子并丟棄溶液。用1X洗滌緩沖液洗滌板3次。

向每個孔中加入100 µL檢測試劑B工作溶液,封住并孵育37°C 30分鐘。

丟棄溶液并按照前一步驟用洗滌緩沖液洗滌板5次。

向每個孔中加入90 µl TMB底物。用蓋子封住板,在37°C下孵育10-20分鐘。避免暴露在光下。孵育時間僅供參考,最佳時間應由最終用戶確定。不要超過30分鐘。

向每個孔中加入50 µL終止液。立即在450 nm處讀取。

結果計算:該檢測是競爭性的,因此樣本中粘肽濃度與測量的吸光度之間存在負相關。創建一個以標準濃度的對數(y軸)和平均吸光度(x軸)為坐標的圖表。通過標準點應用最佳擬合趨勢線。樣本的粘肽濃度可以從標準曲線上插值得出。

 

檢測精密度:

批內精密度(同一批次內的精密度):分別在一塊板上測試3個低、中、高濃度水平的肽聚糖樣本,每個樣本測試20次。

批間精密度(不同批次之間的精密度):在3塊不同的板上測試3個低、中、高濃度水平的肽聚糖樣本,每塊板上測試8個重復樣本。

CV%=(標準差/平均值)×100

批內精密度:CV<10%

批間精密度:CV<12%

注意事項:本品僅限研究使用。

范圍和靈敏度可能會發生變化。為獲得準確結果,樣本濃度必須稀釋至試劑盒的中等范圍。請注意,AbbexaELISACLIA試劑盒針對的是天然樣本的檢測,而不是重組蛋白。Abbexa無法保證重組蛋白的檢測,因為它們可能具有與天然蛋白不同的序列或三級結構。

 

數據示例:

41.png

圖:顯示肽聚糖(Murein)標準OD數據的圖表

 


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