谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量測定試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

Glu 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，不僅是組成蛋白質的 20 種氨基酸之一，而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內主要氨基來源之一。此外，Glu 還是wei精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產。

測定原理：

利用專用提取液提取，然后用顯色劑進行顯色，顯色后在 570nm 下進行測定。

組成：

試劑二臨用前加入 5ml 蒸餾水充分溶解混勻，用不完的試劑仍 4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水。

谷氨酸提?。?/span>

1、細菌或培養細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1ml 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）或細胞培養液樣品：按照血清（漿）或細胞培養液體積（ml）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議取 0.1ml 血清（漿）或者細胞培養液加入 1ml 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 570nm，蒸餾水調零。

2、在有蓋EP 管中加入下列試劑：

混勻，90℃水浴 20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 570nm 波長處記錄吸光值A。△A=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管。

谷氨酸含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255；x 為谷氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。

2、按照血清（漿）或者細胞培養液體積計算

谷氨酸含量(μg/ml)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質量計算

谷氨酸含量(µg/g 鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=135.1×(△A+0.5255) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(500×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.25ml；V2：加入提取液體積，1 ml；V3：加入血清（漿）或細胞培養液體積，0.1 ml； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0037x- 0.5255； x 為谷氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。

2、按照血清（漿）或者細胞培養液體積計算

谷氨酸含量(μg/ml)= [(△A +0.5255)÷0.0037×V1]÷(V3×V1÷V2）=2703×(△A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(V1×Cpr)=270.3×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質量計算

谷氨酸含量(µg/g 鮮重)= [(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.3×(△A+0.5255) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0164×V1]÷(500×V1÷V2)=0.541×(△A+0.5255)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.25ml；V2：加入提取液體積，1 ml；V3：加入血清（漿）或細胞培養液體積，0.1 ml； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

注意：

1、該試劑盒僅適用于發酵液或組織中谷氨酸含量測定，檢測下限為 100µg/ml。

2、標準曲線線性范圍為：100µg/ml -600µg/ml。

3、ΔA 線性范圍為：0.01-1；若大于 1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。