手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法：
| 液相色譜技術(shù),HPLC 是近期發(fā)展起來的一種具有高靈敏度、高選擇性的快速分離、分析技術(shù).它既能用于微量組分的分析測定，又能用于大量的制備分離，靈活多樣，應(yīng)用范圍已超過其它各種分離方法。如果HPLC使用人員能在分析樣品之時就熟悉常見的問題并加以解決，就能避免許多麻煩，讓您在HPLC使用過程中輕松應(yīng)對。 1 液相色譜儀系統(tǒng) 液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進(jìn)樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成（見圖1）。對于整個系統(tǒng)而言，柱子、泵和檢測器是核心部件，同時也是易出問題的主要部位。 2 液相色譜儀常見問題及解決方法 液相色譜儀作為一種高精密儀器，如果在使用過程中操作不當(dāng)?shù)脑?就容易導(dǎo)致一些問題，其中zui常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰形異常問題。 2.1 柱壓問題 柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值，而是指壓力波動范圍在345kPa以內(nèi)（在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)、緩慢的變化是允許的）。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。 2.1.1 壓力過高 這是液相色譜儀在使用中zui常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的情況。此時，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。 ①首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡0.5h，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，再檢查。②打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾頭堵塞。處理方法：將過濾頭取出，用10%的異丙醇超聲30min。如果壓力降至690kPa以下，過濾頭正常，再檢查。③把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常；如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強(qiáng)的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不慎，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。 2.1.2 壓力過低 壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴(yán)重一點會導(dǎo)致泵無法吸進(jìn)液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。 2.2 漂移問題 主要包括基線漂移和保留時間漂移。 2.2.1 基線漂移 一般說來，機(jī)器剛啟動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下（220nm）平衡時間相對會比較長，但如果在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則要考慮下面的原因（見表1）。 2.2.2 保留時間漂移 保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標(biāo)志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了30s可看做保留時間漂移，就無法進(jìn)行定性，要考慮以下原因（見表2）。 2.3 峰形異常問題 峰形問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰形，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待 |
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心