臨床標(biāo)本zui為常用的是血清(漿),ELISA試劑盒有時(shí)由于特定的檢測(cè)目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集,要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。再如治療藥物的檢測(cè),應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測(cè)。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),ELISA試劑盒血清中腎素活性將泛起顯著增高。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會(huì)有一峰值泛起:生長(zhǎng)激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式開釋,因此,在測(cè)定此類激素時(shí),有必要在緊密親密相連的時(shí)間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測(cè)定值。只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面:
ELISA試劑盒樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70 ℃以下。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。,一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面,ELISA試劑盒其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果,且尤以加樣、溫育和洗板等ELISA試劑盒步驟為甚。正確的加樣方法應(yīng)為45度,吸頭貼著孔壁加入,應(yīng)注意角度太小,會(huì)使液體殘留在孔壁上,導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確;吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處!
首先要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA試劑盒測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8 ℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。
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