紫外檢測器在液相色譜儀檢測中的應用
紫外檢測器是液相色譜儀中應用zui廣泛的檢測器,當檢測波長范圍包括可見光時,又稱為紫外-可見檢測器。紫外吸收檢測器不僅靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、有較好的選擇性,而且對環境溫度、流動相組成變化和流速波動不太敏感,因此可用于對光吸收小、消光系數低的物質進行微量分析。既可用于等度洗脫,也可用于梯度洗脫。紫外檢測器對流速和溫度均不敏感,可于制備色譜。其中要注意流動相中各種溶劑的紫外吸收截止波長,如果溶劑中含有吸光雜質,則會提高背景噪音,降低靈敏度。此外,梯度洗脫時,還會產生漂移。
紫外檢測器的工作原理是:當一束單色光透過流動池時,若流動相不吸收光,則吸收度A與吸光組分的濃度C和流動池的光徑長度L成正比。可用公式表示為:A=lg=lg=ECL(式中I0為入射光強度,I為透射光強度,T為透光率,E為吸收系數)。其依據是光吸收定律,從光源發出的光經狹縫、濾光片、樣品池到光電培增管上,使束由于樣品濃度不同所引起光強的變化轉換成光電流的變化,此光電流經放大器輸入到對數轉換器,使透光率T轉成A輸出。根據上式就知測出了A,就知樣品濃度C。若從放大器直接輸入記錄儀,繪出的是樣品透光率T變化的圖譜,若從對數轉換器輸入到記錄儀繪出的是樣品光密度A變化的圖譜。
紫外檢測器分為固定波長檢測器、可變波長檢測器和光電二極管陣列檢測器。按光路系統來分,紫外檢測器可分為單光路和雙光路兩種。可變波長檢測器又可分單波長(單通道)檢測器和雙波長(雙通道)檢測器。PDAD是80年代出現的一種光學多通道檢測器,它可以對每個洗脫組分進行光譜掃描,經計算機處理后,得到光譜和色譜結合的三維圖譜。其中吸收光譜用于定性(確證是否是單一純物質),色譜用于定量。常用于復雜樣品(如生物樣品、中草藥)的定性定量分析。
在使用紫外檢測器分析檢測注意事項以下以保證檢測器的靈敏度。
1. 氘燈的光強受溫度和電壓影響較大,建議在恒溫室內工作或者在冰庫里工作;
2. T調零生產時機內已校準,當更換光電培增管后,需重新校準;
3. 氘燈壽命可達數千小時,若發現記錄儀不能調到10mV,且基線一直往小的方向漂移要考慮換燈。如氘燈不亮可再按一次電源開關,氘燈就會即亮,光電培增管壽命在數千小時以上。注意開機工作時不得拿出樣品池架,以免強光照射光電培增管造成損壞。氘燈發光區域和光電培增管光陰極窗口沾污時,可用干凈棉芯酒精擦拭干凈。
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