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AP標記蛋白/抗體試劑盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit

堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）是一種普遍存在的二聚金屬酶類，由Suzuki等在1907年首先發現的。生理作用是非特異性水解磷酸單酯鍵，分子量大小為120kDa，zui適pH值為8.6-10.3，因此稱為堿性磷酸酶。AP廣泛運用于酶聯（ELISA）、Western Bloting以及免疫組化技術等，作為多個試劑盒顯色體系的關鍵成分，對試劑盒的質量有重要影響。堿性磷酸酶比活性高，穩定，所以經常被用于抗體或其他蛋白質的標記，而不會影響偶聯蛋白的活性和功能。

戊二醛由于具有較低的價格和較高的活性，已成為zui常用的用于AP偶聯的交聯試劑。這種使用戊二醛的AP偶聯標記方法已經被廣泛認可，但是也存在一定的缺陷，比如在標記時對戊二醛和抗體間的比率非常敏感，不合適的配比可能會導致較低的溶解性和酶活力；同時在標記過程中，也很難避免不同活力的混合物出現，因此在偶聯時，待偶聯反應發生后需要進行淬滅，純化并去除多余的交聯物；另外，對于待偶聯物不同的制備來源和分子量大小，都會對zui終的交聯反應產生較大的影響。馬來酰亞胺（maleimide）也被用于交聯反應，其糖基部分可以與巰基反應以形成穩定的偶聯物，但是需要提前對偶聯抗體或蛋白進行二硫鍵還原處理。

SureLINK AP Conjugation Kits AP偶聯標記試劑盒內提供了一個比上述方法更優秀更快捷的AP偶聯方案。其原理是采用雙偶聯的技術分別對AP和抗體進行交聯，如左上圖所示。琥珀酰亞胺-4-苯甲酸甲酯Succinimidyl-4-Formyl Benzoate （SFB）的醛基與抗體蛋白結合，同時Succinimidyl 6-hydrazinonicotinate Acetone Hydrazone（SANH）的肼基偶聯上AP，這樣通過醛基與肼基之間形成穩定的腙鍵而實現抗體蛋白與AP的偶聯。

作為即用型的組分，SureLINK™AP偶聯蛋白/抗體試劑盒能在90分鐘制備完成標記HRP的抗體或蛋白。制備好的AP標記的抗體或蛋白能在4℃穩定保存至少半年。試劑盒內包括SureLINK Modified AP（干粉）、AP激活及偶聯緩沖液、SFB以及AP儲存緩沖液。每毫克經SFB修飾的AP可結合0.1-0.5mg抗體或蛋白，特別適合于AP單克隆抗體的制備。經SureLINK AP Conjugation Kits 偶聯試劑盒標記的抗體，結合相應的顯色或化學發光底物，可應用于ELISA、WB及免疫組化等方法的免疫學檢測及定量分析。

SureLINK™ AP標記抗體/蛋白試劑盒具有以下優點：

• 方便快速：兩步反應（見右），近三個小時（20分鐘手動工作）就可以完成整個交聯反應；
• 活性強：可以標記從0.05mg到1.5mg范圍的抗體（蛋白）；
• 通用性：可以用于下游各種免疫檢測實驗，比如ELISA, Western blotting和免疫組化

除了完整的AP標記抗體/蛋白試劑盒，還有單獨組分的SureLINK Modified AP（干粉狀的激活AP）提供。

作為美國zui早實現親和素純化二抗商業化的生物公司，同時也是世界上zui大的二抗和底物顯色系統的生產商。 KPL一直提供高質量的用于分子生物學、免疫學、細胞生物學和體外診斷試劑及用于蛋白和核酸檢測的試劑盒。針對于蛋白標記以及蛋白偶聯，KPL有HRP及AP標記及偶聯試劑盒，還有專門用于兩個蛋白質之間的偶聯試劑盒提供。另外還有多種化學發光和顯色底物及相關產品，以及全系列針對不同種屬的各種標記的現貨二抗。如果您對KPL的產品感興趣，請致電/9569 /8795/4237到西美杰科技有限公司免費索取相關產品資料，或者問詢您所感興趣的產品類型。