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腺相關病毒 (AAV) 是基因治療中使用廣泛的傳遞機制。近年來，基于AAV病毒開發的基因療法的研發及臨床試驗注冊項目數量呈指數級增長，截至目前，美國FDA已批準五項AAV療法，同時，用于基因治療的AAV也是全球市場上最為昂貴的藥物之一，其中售價最高的Hemgenix®，每劑價格約為350萬美元。由于該療法每劑量可能需要1011-1016載量的AAV病毒，如何實現高效的AAV生產，已成為工藝流程優化中的重要一環。

西美杰代理的Mirus成立于1996年，在核酸遞送領域深耕多年，TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑支持AAV及慢病毒(LV)從科研到GMP商業級別生產。不同于傳統基于單組分的轉染試劑(如陽離子聚合物聚乙烯亞胺，PEI)，Mirus將多聚物及脂質技術進行多重組合，針對不同細胞類型，不同應用場景，有著不同轉染方案。

Mirus遞轉平臺Polymers + Lipids的多重、多功能組合

RevIT™ AAV Enhancer提高AAV產量的利器

   在病毒生產工藝方面，除了需要克服細胞遞轉過程中的多重阻礙，以實現更高效轉染和更低細胞毒性；增強子的加入，還可大幅度提升多種血清型AAV病毒生產載量。但Mirus并沒有止步于此，為了進一步提高下游生產中的AAV產量， 今年七月底西美杰代理的Mirus發布用于AAV生產的RevIT™ AAV Enhancer，可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑或其他品牌轉染試劑 (如PEI等)。基于HEK293懸浮細胞數據，相對于老版本AAV增強子，RevIT™ AAV Enhancer可將AAV基因組滴度提高1.2-4.9倍，并且使用更便捷，非常容易整合入現有的AAV生產工藝流程中。Mirus RevIT™ AAV Enhancer的推出，使得AAV上游生產成本進一步降低成為可能，進而降低基因治療藥物單劑量成本。

RevIT™ AAV Enhancer

RevIT™ AAV Enhancer：可以將AAV基因組滴度提升1.2-4.9倍

實驗結果顯示，平行對比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增強子(VirusGen + Enh 1.0)和新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT)，針對AAV2、AAV8、AAV9不同血清型，基因組滴度分別有著1.6、4.9以及1.2倍提升。除此之外，在測試的所有血清型中，使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上收獲了更高比例的實心率 (圖1)。該結果表明，在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®轉染試劑時，新版本增強劑RevIT™ AAV Enhancer可顯著提高AAV基因組滴度(GC/mL)及實心率(%Full Capsids)。

圖1 . 相比Mirus老版本增強子，加入RevIT™ AAV Enhancer后，可將AAV基因組拷貝數提升1.2-4.9倍，同時改善AAV病毒實心率。

RevIT™ AAV Enhancer具有廣泛適配性，搭配其他品牌轉染試劑（如PEI），AAV病毒基因組滴度有著顯著提升

平行測試兩個品牌轉染試劑：Polyplus FectoVIR®轉染試劑(“Polymer F")以及Polyplus PEIpro®轉染試劑(“Polymer P")，在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer，針對不同血清型AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因組滴度分別有著1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(圖2)。實驗結果表明，在搭配其他品牌病毒轉染試劑時，Mirus RevIT™ AAV Enhancer也可顯著提高AAV病毒基因組滴度(GC/mL)。

圖2. “Polymer F"以及“Polymer P"病毒轉染試劑搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer，針對不同血清型AAV，其病毒基因組滴度都有著顯著提升。

RevIT™ AAV Enhancer具有廣泛的適配性，可適用于不同培養基體系

Mirus TransIT-VirusGEN®轉染試劑搭配RevIT™ AAV Enhancer，在不同品牌的病毒生產培養基中，具有很好的兼容性。測試使用293-VP 2.0細胞，搭配培養基類型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。實驗結果表明，針對不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9，RevIT™ AAV Enhancer在不同培養基實驗條件下，AAV病毒基因組滴度提升方面并無顯著差異（圖3）。

圖3. 更換不同品牌病毒生產培養基，AAV病毒基因組滴度的增加無顯著差異。

RevIT™ AAV Enhancer實驗流程更靈活，在轉染的不同時間窗口加入有著近似表現

為了進一步確認加入RevIT™ AAV Enhancer來提高AAV產量是否需要嚴格把控加入時間，平行測試了不同加入的時間點，包括轉染前30min或60min、轉染時及轉染后。實驗結果顯示，相比于對照組，在不同時間點加入RevIT™ AAV Enhancer， AAV8病毒基因組滴度均有穩步的提升(2倍)，并且病毒實心率也穩定保持在相同水平（圖4）。該實驗結果表明，RevIT™ AAV Enhancer加入時間點的靈活性，一定程度上簡化了生產工作流。

圖4.  RevIT™ AAV Enhancer在轉染的不同時間窗口加入有著近似表現

 RevIT™ AAV Enhancer提高AAV產量的利器

實驗tips：如何進行病毒轉染試劑評估？什么是病毒載量？如何檢測？

  更多詳細信息，請查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card ，更加詳細地介紹了檢測和計算病毒滴度的詳細方法。

相關產品信息及鏈接

 
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Mirus產品年鑒

   西美杰代理的美國Mirus公司成立于1995年，是世界上很早開發高效、低毒轉染試劑的公司，同時也是該類試劑的主要供應商之一。其產品線涵蓋化學轉染試劑、電轉染產品、病毒生產和轉導產品，適用于基因功能研究、蛋白生產、病毒載體生產和動物模型構建等領域。Mirus許多杰出成果獲得廣大用戶的好評。

   北京西美杰科技有限公司是Mirus中國區代理，始終秉承著專業、嚴謹的態度為客戶提供優質的產品與服務，Mirus熱銷轉染產品常備現貨。西美杰是Applichem代理，KERRY代理，Pfanstiehl代理，Cygnus代理，c-LEcta DENARASE®代理，SeraCare (KPL)代理，Lifespan（LSBio)代理，Phytotech代理，Agrisera代理，Cali-Bio代理，Jena Bioscience代理，Immundiagnostik代理，Advanced BioMatrix代理，Mirus代理，Alzet代理Genetics代理，Cell Biolabs代理，MYOCEA代理，Gropep代理，MyBioSource代理，Hampton代理，LeeBio代理，Cal Bioreagents代理，Everest Biotech代理，Nordic-Mubio（SCICONS）代理，Exalpha代理，SCIGEN代理，MiTeGen代理，Prospec代理，歡迎大家咨詢訂購。