人腫瘤標志物CA72-4 ELISA檢測試劑盒

CA72-4(癌抗原72-4)初被描述為由B72.3識別的抗原因子。B72.3是由相應的原發腫瘤轉移后的膜萃取物免疫雜交生產的鼠單克隆抗體。CA72-4被證實是1MDa的粘液樣糖蛋白，合成物稱為TAG72（腫瘤相關抗原72）。TAG72蛋白的分子量為48KD. 血清和血漿中的CA72-4的水平升高見于某些惡性疾病，包括胰、胃、膽、結腸、乳腺、卵巢、子宮頸、子宮內膜的腫瘤。它對胃腸道和卵巢的腫瘤有很高的診斷學的敏感性。盡管在一些良性的疾病如風濕病和卵巢囊腫也發現有CA72-4的升高，但是臨床研究表明，對于胃腸道和卵巢腫瘤，特異性診斷高達95％。CA72-4的水平和腫瘤的大小及分級緊密關聯。CA72-4是胃腸道腫瘤的病人選擇治療學的監測和隨后的護理的指標。另外合適的指標是CA199和CEA，另外，CA72-4是卵巢腫瘤的病人選擇治療學的監測和隨后的護理的可靠性指標，尤其是對于CA125陰性的病人。

【檢測原理】

DRG公司的CA72-4人腫瘤標志物檢測試劑盒酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔包被有能結合CA72-4分子上*抗原位點的單克隆小鼠抗體。一份含有內源性CA72-4的病人樣本在包被孔中與酶聯物進行孵育，該酶聯物是一種聯結有辣根過氧化物酶的抗CA72-4抗體。孵育后，用洗滌液洗去未結合的酶聯物。結合上的辣根過氧化物酶的總量與樣本中CA72-4的濃度成正相關。加入底物溶液后，顯出的顏色強度與病人樣品中CA72-4的濃度成正比。

【主要組成成分】

1. 微孔板：             12×8孔，可拆，微孔中包被抗CA72-4 單克隆抗體。

2. 標準品（0-4）： 5支 0.5ml，即用型，濃度為0，3，20，50，100U/ml，內含無水銀防腐劑。

3. 高低質控：          2支 凍干粉，0.5ml，見“試劑準備"，質控品的濃度及范圍請見試劑瓶標簽或質控單。內含無水銀防腐劑。

4. 樣品稀釋液：   1支，3ml，即用型，內含無水銀防腐劑。

5. 酶聯物：              1支 1.4ml，10倍濃縮，標記辣根過氧化物酶的抗CA72-4抗體，內含無汞防腐劑。

6. 酶聯物稀釋液：      1支，14ml，即用型型，含無汞防腐劑。

7. 底物液：      1支，14ml，即用型。

8. 終止液：      1支，14ml，即用型，含0.5M的硫酸，避免接觸終止液，以免刺激或著燒皮膚。

9. 洗滌液（40X）：   1支，30ml。

注意：用于樣品稀釋的樣品稀釋液應視需要而定。

實驗需要器材（但試劑盒不提供）

1. 酶標儀(450±10nm)。

2. 移液器

3. 吸水紙

4. 蒸餾水

5. 計時器

6. 坐標紙或是數據處理軟件

檢測步驟

CA72-4檢測每次實驗都應含有一條標準曲線。

1. 將實驗所需數目的板條固定在板架上。

2. 用一次性吸嘴將20µL的標準品﹑質控品和樣品加入相應的檢測孔中。

3. 每孔加入100µL的新鮮配制的酶聯物。*混合十秒，在此步驟里，充分搖勻十分重要。

4. 在室溫下溫育120分鐘。

5. 快速棄去檢測孔中的內含物，每孔用400µL洗滌液洗板五次，在吸水紙上用力拍板以除去殘留的液體。注意：洗板步驟是否正確將直接影響到實驗的靈敏度和精.確性。

6. 每孔加入100µL的底物液。

7. 在室溫下溫育30分鐘。

8. 每孔加入100µL的終止液終止反應。

9. 在加終止液后十分鐘內，室溫下，于450±10nm處讀取吸光率。

【結果計算】

1. 計算標準品﹑質控品和病人樣品的平均吸光率。

2. 以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標準品中獲得的平均吸光率和其相對應的濃度值，繪制標準曲線。

3. 利用樣品的平均吸光率，在標準曲線上得出其相應的濃度值。

4. 自動方法：使用立方函數﹑四參數模式或雙對數的計算機程序可得到結果。

5. 樣品的濃度可從標準曲線上直接獲取。樣品的濃度高于.高標準品的濃度則需進一步稀釋。在計算樣品的濃度的時候，要乘以稀釋倍數。

下面是CA72-4 ELISA的標準曲線的典型例子。

【期望值】

每個實驗室必須建立自己的正常值。

以下是利用DRG公司的CA72-4人腫瘤標志物檢測試劑盒（酶聯免疫法）EIA-5071對正常成年人測試所得到的結果：

【注意事項】

1. 在使用前所有試劑和樣品均需平衡至室溫，所有試劑要充分混合但不要起泡。

2. 一旦實驗開始，所有步驟都必須進行到底而不能中斷。

3. 對每種試劑﹑標準品和樣品使用一次性的吸嘴，以避免交叉污染。

4. 吸光率決定于溫育時間和溫度，在開始實驗前，建議準備好所有的試劑，將需要檢測的微孔板固定在板架上，這些步驟保證每次加液步驟所需時間相同而沒有中斷。

5. 按照一般的規律，酶反應時間與溫育時間和溫度成線性比例。

【生產企業】

德國 DRG Instruments GmbH

【國內售后單位】

深圳市科潤達生物工程有限公司

地址：深圳市坪山區坑梓中興路14號A棟