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線粒體呼吸鏈系列試劑盒 AMP含量試劑盒

產品簡介 ：
    AMP 廣泛存在于動物、 植物、微生物和培養細胞中， 是描述細胞能量代謝狀態的主要參數。 測定 AMP含量并且計算能荷，能夠反映能量代謝狀態。
    AMP 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色譜法測定其含量。

試驗中所需的儀器和試劑：
    高效液相色譜儀、低速離心機、溶劑抽濾裝置、針頭式過濾器（水系，50 個，0.22µm） 、濾膜（水系和有機系各 1 個，0.45µm） 、C18 柱（4.6 ×150 mm） 、可調式移液器、樣品瓶（50 個，2mL） 、甲醇（色譜級，300 mL） 、甲醇（色譜級，300 mL） 、蒸餾水

產品內容 ：
     試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
     試劑二：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
     試劑三： 粉劑 1×1 瓶， 粉劑 2×1 瓶， 4℃保存； 臨用前用少量蒸餾水將粉劑 1 和粉劑 2 溶解后倒入 1000mL容量瓶中，用蒸餾水定容 1000mL，形成流動相緩沖液基質（注：試劑瓶中的粉劑要沖洗干凈）, 4℃可保存 1 周；
     試劑四： AMP 標準品 5mg×1 支， -20℃保存。 臨用前加入 1mL 雙蒸水， 配成 5mg/mL 溶液， 配好后-20℃可保存 1 周；

操作步驟 ：
一 、 實驗前的準備工作 ：
     1、將雙蒸水 1000 mL、流動相緩沖液基質 1000 mL 和甲醇 300 mL 用 0.45 µm 的濾膜抽濾，以除去溶劑中的雜質，防止堵塞色譜柱。（注：雙蒸水和緩沖液基質用水系濾膜抽濾，甲醇用有機系濾膜抽濾）。
     2、 流動相的配制： 將抽濾完畢的流動相緩沖液基質 1000 mL 與甲醇配比為 99.9： 0.1 （v/v） ， 即取 999mL緩沖液基質與 1mL 甲醇混合。
     3、將抽濾完畢的甲醇和雙蒸水配比成 100%的甲醇， 10%的甲醇，雙蒸水各 250 mL。 將 2 和 3 中的溶劑超聲 30 分鐘，以脫去溶劑中的氣泡，防止堵塞色譜柱。

二 、AMP  的提取 ：
     1、組織的處理：準確稱取組織重量 0.1g，加入 1mL 試劑一，提取 AMP， 4000 g 常溫離心 15 min，取上清液，加入等體積的試劑二，混勻，4000 g 常溫離心 15 min，取上清，0.22µm 水系微孔濾膜過濾后冰上放置，待測。

     2、 細胞處理： 收集約 30 mL 細胞， 離心菌體經干燥后， 加入 1 mL 試劑一， 超聲破壁細胞(950 W， 30%，15 min，工作 1 s 間隔 2 s)，4000 g 常溫離心 15 min，取上清液，加入等體積的試劑二，混勻，4000 g 常溫離心 15 min，取上清，0.22µm 水系微孔濾膜過濾后冰上放置，待測。

三 、AMP  含量測定操作步驟 ：
     1. 開啟電腦、檢測器和泵，安裝上色譜柱，打開 empower 軟件，在方法組中設置進樣量 20 µL，流速 1mL/min，保留時間 10min，檢測波長 254nm,設置完畢保存方法組。
     2. 用 100%的甲醇、10%的甲醇、雙蒸水按甲醇濃度從大到小的順序洗色譜柱 30min。
     3. 用流動相洗柱子，待基線穩定后開始加樣。
     4. 加入標準品 20 µL，在 10min 內可分離 AMP，AMP 的保留時間在 7min 左右（柱子不同，保留時間有差異），計算不同濃度的 AMP 標準品的峰面積。
     5. 加入樣品 20 µL，在相應保留時間處檢測 AMP 的峰面積。
        AMP  含量的計算 ：將 5mg/ml 的 AMP 標準品用雙蒸水分別稀釋成 100 µg/ml、80 µg/ml、60 µg /ml、40 µg /ml 和 20 µg /ml的 AMP 標準品溶液，以標準品濃度（µg/ml）為橫坐標，峰面積為縱坐標分別計算 AMP 標準曲線。
        注：標準品的稀釋倍數要根據樣品中 AMP 濃度確定，樣品中 AMP 的峰面積必須落在不同濃度的 AMP 標準品的峰面積之內，該標準品稀釋倍數只是一個參考。

線粒體呼吸鏈系列試劑盒 AMP含量試劑盒訂購說明：

1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨款后，將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。