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BCA  微量蛋白濃度測定試劑盒說明書
貨號：PC0050
規格：500 微孔(500T)/1000 微孔(1000T)/2000 微孔（2000T）
保質期：本試劑盒自訂購之日起一年內有效。
產品內容：
包裝 500  微孔 1000  微孔 2000  微孔 保存
BCA 試劑 100ml 2×100ml 4×100ml 室溫
Cu 試劑 3ml 6ml 12ml 室溫
PBS 稀釋液 30ml 60ml 120ml 室溫
BSA 蛋白標準 (5mg/ml BSA) 0.3ml 0.5ml 1ml -20℃
產品簡介：
堿性條件下，蛋白將Cu 2+ 還原為Cu + ， Cu + 與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在 562nm處的吸收
值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢
測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發現樣品稀釋
液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
操作說明：
一 . 微孔酶標儀法
1. 配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按 50 體積 BCA 試劑加 1 體積 Cu 試劑（50:1）配制成 BCA
工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA 工作液室溫 24 小時內穩定。
2. 稀釋標準品：先用 PBS 將 BSA 標準品稀釋終濃度為 0.8mg/ml 備用。再依次稀釋 80、40、20、
10、5、2.5ug/ml.。
3. 高濃度蛋白可將樣品作適當稀釋（多做幾個梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀釋） ，由于移液器
在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線 1/2 后。
4. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液和 40ul 稀釋后的蛋白或標準品溶液，對照孔加入 PBS 稀釋液。37
℃放置 4 小時。用酶標儀測定 A562nm，根據標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時，應注意防止因水
分蒸發影響檢測結果。
二 . 分光光度計法
如沒有酶標儀，在離心管中混勻樣品后加入比色皿，用分光光度計比色。
采用分光光度計測定蛋白濃度方法與酶標儀法相似， 只需要按照分光光度計比色皿容量要求按照比例
配置相應的 BCA 工作液和標準品溶液。
常規比色皿用量為 200ul 有樣本加入 1mlBCA 工作液或 400ul 樣本加入 2mlBCA 工作液。微量比色皿
用量為 20 樣本加入 100ul BCA 工作液。或根據儀器情況自行調整。
附：樣本及標準品稀釋示意圖
樣本管號  A  B  C  D  E
PBS 稀釋液用量  180  100  100  100  ……
標準品用量  20（原液） 100（從 A 管吸出） 100（從 B 管吸出） 100（從 C 管吸出） ……
終濃度（ug/ml） 80  40  20  10  ……
注意事項：
1. 長期不用時，Cu 試劑與 PBS 稀釋液可置于 2-8℃保存，如發現細菌污染則應丟棄。BCA 試劑在低
溫條件下出現結晶沉淀時，可 37℃溫育使其*溶解, 不影響使用。
2. 樣品中若含有較多干擾物質時，請采用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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