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大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群測試片使用說明書

 1.適用范圍：適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗

2.方法原理：耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform  bacteria）是總大腸菌群的一部分．將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌（E.coli） 是zui準確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片運用酶底物技術，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的顯色底物（XGLUC/blue），以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的顯色底物（SalmonGal/red）, 經過44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍色，紅色或紫藍色菌斑都屬耐熱大腸菌群。
3 操作方法

3.1對于大腸菌群檢驗顯示陽性的紙片或產酸產氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉入2－3mL無菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結果。

4 結果判讀: 測試片上出現(xiàn)紅色或紫藍色菌斑都是耐熱大腸菌群陽性，其中紫藍色為大腸埃希氏菌陽性。沒有紅色或紫藍色斑點為陰性結果。

十、致病菌檢測試劑盒使用說明

1適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品中致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希氏菌（含腸出血性大腸桿菌O157:H7）、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測的檢測以及大腸菌群污染程度的檢測。

2方法原理：依據國標GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術將相對應培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時取用。

3樣品稀釋：同國標法。液體樣品取原液。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液。

4 致病菌檢測

4.1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml（不得少于4ml）分別加入到標號為1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）內。加樣后的1、2、3號分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液；A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。

4.2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18小時。

4.3 觀察結果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預示含有此種致病菌。可按國標法進一步檢測。也可取陽性菌液1mL，加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內，混勻，取1mL，接種到相對應的測試片上，36℃±1℃培養(yǎng)18小時加以驗證。

5大腸菌檢測

5.1加樣：將試劑盒放在試驗臺面上，打開盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標號為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內。另用滅菌吸管分別吸取3個1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標號為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內，標號為10的小培養(yǎng)基孔內可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對照孔使用。

5.2排氣泡：加樣后集氣窗內如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數下排出氣泡。

5.3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18～24小時。

5.4觀察結果：樣液變?yōu)辄S色為產酸、集氣窗中有氣泡為產氣，產酸產氣者為陽性結果，陽性結果的孔數越多，說明污染越嚴重。

6 注意事項

6.1致病菌檢測與大腸菌檢測可同時進行；加入樣品后不需搖勻；大腸菌檢測培養(yǎng)前一定要排氣泡，排氣泡的方法與結果觀察可參見大腸菌試劑盒使用說明中的圖像顯示；在培養(yǎng)箱中取試劑盒時注意平托出來，避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽性集氣窗中的氣泡流失而影響結果判斷。

6.2試劑盒為一次性無菌包裝用品，供一次性即開即用，。

7 保存條件和有效期：避光保存于陰涼干燥處，*溫度為2～8℃，有效期18個月。