金蓮橙OOO指示劑公司正在銷售的產(chǎn)品：雞α-內(nèi)肽(α-EP)試劑盒Anti-WNT1 AntibodyAlexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗大鼠IgG
雞CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白γ(C/EBPγ)試劑盒 Anti-WISP1 AntibodyAlexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗大鼠IgG
雞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)試劑盒Anti-WNT10A AntibodyPE-Cy5.5標(biāo)記的

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：指示劑

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：?jiǎn)我凰釅A指示劑

注意事項(xiàng)：金蓮橙OOO又稱橙黃II,桔黃II或者酸性橙7第一變色范圍：7.6-8.9,顏色由綠色變?yōu)槊倒迳?；第二變色范圍?0.3-12.0,顏色由黃色變?yōu)榧t色。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

巨大芽胞桿菌錨定蛋白G抗體Human LRRC52 ELISA Kit豬Ⅶ(FⅦ)免疫試劑盒

杰丁塞伯林德納氏酵母肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體Human LRWD1(Leucine-rich repeat and WD repeat-containing protein 1) ELISA Kit豬Ⅱ(FⅡ)免疫試劑盒

淡黃濕傘整合樣金屬蛋白與凝血1型抗體Human LRSAM1 ELISA Kit豬凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)免疫試劑盒

Streptomyces setonensis Shomura整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗體 (N端抗體)Human LSAMP ELISA Kit豬腦鈉(BNP)免疫試劑盒

單核增生李斯特氏菌整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗體Human LSG1 ELISA Kit豬鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(SGLT1)免疫試劑盒

黑曲霉內(nèi)收蛋白抗體Human LRRC29 ELISA Kit豬內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒

梨形卷枝霉脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體Human LSM1 ELISA Kit豬內(nèi)皮1(ET-1)免疫試劑盒

假絲酵母屬脂聯(lián)受體1抗體Human LRRC4C ELISA Kit豬末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫試劑盒

鼠李糖小短桿菌腎上腺髓質(zhì)受體抗體Human LRRC18 ELISA Kit豬繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)免疫試劑盒

釀酒酵母脂聯(lián)抗體Human LSG1 ELISA Kit豬免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒

分枝桿菌腎上腺髓質(zhì)抗體Human LRRC52 ELISA Kit豬免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒

蒙古口蘑腺苷受體A3抗體Human LRRC20 ELISA Kit豬免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒

產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型ADRA2腎上腺能受體2抗體Human LRCH3 ELISA Kit豬免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒

鏈霉菌腎上腺能受體β1抗體Human LRCH2 ELISA Kit豬糜蛋白免疫試劑盒

凍土毛霉腎上腺能受體β2/β2-AR抗體Human LRPPRC ELISA Kit豬流行性乙型腦炎抗體(IgG)免疫試劑盒

樟疫霉晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體Human LRP2BP ELISA Kit豬磷脂A2(PLA2G1B)免疫試劑盒

#金針菇Flammulina│velutipes var. velutipes (Curtis) Singer 質(zhì)量規(guī)格：BR補(bǔ)體片斷3b試劑盒竹紅菌

費(fèi)希新薩托菌Neosartorya│fischeri 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR補(bǔ)體片斷3a試劑盒藏紅花

匍枝根霉(黑根霉)Rhizopus│stolonifer 質(zhì)量規(guī)格：BR補(bǔ)體片段4d試劑盒cis-紫莖女貞苷B
金蓮橙OOO指示劑Human P27 protein ELISA Kit  人P27蛋白規(guī)格： 48T

P-gp(Human permeability glycoprotein) ELISA Kit  人P糖蛋白/滲透性糖蛋白規(guī)格： 48T

CCSA-3(Human colon cancer-specific antigen-3) ELISA kit  人大腸癌專一抗原3規(guī)格： 48T

CCSA-2(Human colon cancer-specific antigen-2) ELISA kit  人大腸癌專一抗原2規(guī)格： 48T

CCSA-4(Human colon cancer-specific antigen-4) ELISA kit  人大腸癌專一抗原4規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。