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產品分類：酶類染色

儲存條件：4℃,避光,3個月

用途：腺苷三磷酸酶染色

注意事項：主要由孵育液、硝酸鈷、硫化銨、陰性對照孵育液等組成。酶活性部位呈棕黑色或黑色。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。

川芎（標準品） 3-Phosphoglyceric Phosphokinase白介-10受體β抗體包裝250mg

川芎(標準品) d-ribulose 1,5-diphosphate/RuDP白介-12受體β1抗體包裝1g

川續斷皂苷VI（標準品） Acidic Protease from Aspergillus 白介-12受體β2抗體包裝25g

川續斷皂苷乙（標準品） Prometryn白介15受體α抗體包裝5g

穿山（標準品） Sulforaphane白介17受體抗體包裝25g

穿山龍（標準品） Mecobalamin白介-17B受體抗體包裝5g

（標準品） (S)-Ketoprofen trometamol白介-18受體β鏈抗體包裝1g

內酯（標準品） (S)-Ketoprofen trometamol白介21抗體包裝25g

船形烏頭（標準品） Phytagel白介21受體抗體包裝5g

垂盆草（標準品） (S)-(+)-Ketoprofen白介-22抗體包裝1g

椿皮（標準品） sulfosalicyclic acid白介29抗體包裝25g

慈溪麥冬皂苷A 1-Amino-2-naphthol-4-sulfonic Acid 白介22受體結合蛋白抗體包裝5g

次野鳶尾黃（標準品） 10,11-Dihydro-10-hydroxy Carbamazepine 白介-1受體相關激4抗體包裝1g

甘草查爾(標準品) S-Notoginsenoside R2干擾調節因子4抗體包裝5g

槐苷 Zinc acetate胰島樣生長因子1受體β/IGF-IRβ 抗體包裝1g

粉紅單端孢Trichothecium│roseum 質量規格：≥40%可溶性OX40L試劑盒花椒;8-Methoxypsoral

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規格：≥50%,BR可溶性Endoglin試劑盒環氧澤瀉烯;Alismoxide

Streptococcus castoreus模式菌株: 未知 質量規格：≥90%可溶性CD86試劑盒海柯皂苷元;Hecogenin
ATPase染色液Gentamicin/FITC  熒光su標記慶大霉su規格： 1ml

Tetracycline/OVA  四環su偶聯雞卵白蛋白規格： 2mg

Oxytetracycline/BSA  土霉su偶聯牛血清白蛋白規格： 2mg

Oxytetracycline/OVA  土霉su偶聯雞卵白蛋白規格： 2mg

streptomycin/OVA  鏈霉su偶聯血藍蛋白規格： 5mg

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5）   之后更換正常培養基培養即可。