詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | 磷酸化N-鈣粘附分子抗體 |
英文名稱 | phospho-CDH2 (Tyr820) |
規格 | 0.1ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
小鼠CD3分子(CD3) 根瘤菌用途: 固氮
小鼠小扁豆素結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體3(AFP-L3) 棉毛狀嗜熱霉拉丁屬名: Thermomyces lanuginosus
小鼠小扁豆素結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2) 釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
小鼠小扁豆素結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體1(AFP-L1) Albidiferax拉丁屬名: Albidiferax sp.
小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA) 釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
小鼠脂酰絲氨酸(PS) 矮小微桿菌拉丁屬名: Microbacterium pygmaeum
小鼠膽堿酸甘油酯(PC/CPG) 乳酪短桿菌拉丁屬名: Brevibacterium casei
小鼠Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽(ⅠCTP) pMIR-Report Luciferase拉丁屬名: 宿主:DH5α,BL21
小鼠神經絲蛋白(NF) 三葉草根瘤菌用途: 與三葉草共生固氮
小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm) 三葉草葉桿菌拉丁屬名: Phyllobacterium trifolii
小鼠絲氨酸/蘇氨酸蛋白酸酶(STK) 乳酸鏈球菌拉丁屬名: Streptococcus lactis(Lister) Lohnis
小鼠高鐵血紅蛋白(MHB) 缺陷短波單胞菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ) 大豆慢生根瘤菌用途: 與大豆共生固氮,培養基pH4.4生長
小鼠少突膠質細胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab) 土曲霉原變種拉丁屬名: Aspergillus terreus var. terreus
小鼠抗核抗體(ANA) 芽胞桿菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
小鼠鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH) 慢生根瘤菌用途: 與花生共生固氮良好
磷酸化N-鈣粘附分子抗體細胞色素c氧化酶7A2抗體Melilotigenin B中文名:別名:分子式:C30H46O3
CD80抗體β-Amyrel中文名:11-氧代-β-香樹脂醇別名:11-Oxo-β-amyrin; 3β-Hydroxyolean-12-en-11-one分子式:C30H48O2
5號染色體開放閱讀框22抗體Triptotriterpenic acid A中文名:雷公藤三萜酸A別名:Abrusgenic acid; Maytenfolic acid分子式:C30H48O4
鈣激活氯離子通道4蛋白抗體Ursonic acid中文名:別名:3-Oxo-12-ursen-28-oic acid分子式:C30H46O3
嗜酸粒細胞趨化蛋白3抗體Wilforlide A acetate中文名:別名:分子式:C32H48O4