詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | 溴區結構域相鄰鋅指蛋白1A抗體 |
英文名稱 | ACF1 |
規格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
載脂蛋白B100apo-B100英文名稱:Rabbit apoprotein B100, apo-B100
轉化生長因子β2TGFβ2英文名稱:Rabbit transforming growth factorβ2, TGFβ2
一氧化氮合成酶NOS英文名稱:Rabbit nitric oxide synthase, NOS
內皮型一氧化氮合成酶eNOS英文名稱:Rabbit Endothelial nitric oxide synthase, eNOS
尿激酶型纖溶酶原激活物uPA英文名稱:Rabbit urokinase plasminogen activator, uPA
超敏C反應蛋白hs-CRP英文名稱:Rabbit high sensitivity C-Reactive Protein, hs-CRP
基質金屬蛋白酶1MMP-1英文名稱:Rabbit matrix metalloproteinase 1, MMP-1
血小板因子4PF-4/CXCL4英文名稱:Rabbit Platelet Factor 4, PF-4
中性粒細胞彈性蛋白酶NE英文名稱:Rabbit neutrophil elastase, NE
補體片斷3aC3a英文名稱:Rabbit Complement fragment 3a, C3a
基質金屬蛋白酶3MMP-3英文名稱:Rabbit matrix metalloproteinase 3, MMP-3
可溶性CD40配體sCD40L英文名稱:differentiation 40 ligand, sCD40L
高遷移率族蛋白B1HMGB-1英文名稱:Rabbit High mobility group protein B1, HMGB-1
B細胞淋巴瘤因子2Bcl-2英文名稱:Rabbit B-cell leukemia/lymphoma 2, Bcl-2
色素上皮衍生因子PEDF英文名稱:Rabbit pigment epithelium-derived factor, PEDF
溴區結構域相鄰鋅指蛋白1A抗體Brevibacterium sp.分離基物: 水樣/紅海鹵水提供形式: 斜面培養物模式菌株: no應用領域: 微生物/耐鹽菌(可耐受鹽濃度為96‰)培養基: 821生長條件: 22℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Streptomyces sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產生抗腫瘤活性物質培養基: CM0012生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
粘質沙雷氏菌種屬: Serratia marcescens提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 致病菌檢測芯片培養基: 2生長條件: 35℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Brevibacterium ammoniagenes提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產賴氨酸。培養基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Candida utilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0013生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Acetobacter aceti分離基物: 醋提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于發酵醋酸培養基: 1生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Enterococcus faecalis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 研究培養基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法
Aspergillus oryzae分離基物: 小麥提供形式: 斜面培養物;凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于儲糧微生物研究培養基: 17生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Aspergillus awamori提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 以廢糖蜜為原料發酵檸檬酸。培養基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法