結(jié)晶紫-檸檬酸染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：綿羊基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)試劑盒Anti-HCAR3 Antibody豬藍(lán)耳病病M蛋白
綿羊補(bǔ)體1抑制因子(C1INH)試劑盒 Anti-HCLS1 Antibody雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病）偶聯(lián)辣根過氧化物酶
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綿羊磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC3)試劑

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產(chǎn)品分類：染色其他

儲(chǔ)存條件：室溫,6個(gè)月

用途：生物染色

注意事項(xiàng)：主要由結(jié)晶紫和0.1M檸檬酸組成。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

DB (彌漫大B淋巴瘤) (通過STR鑒定）雙特異性蛋白磷26抗體（絲裂原活化蛋白激磷8）Human PPP2R4(Serine/threonine-protein phosphatase 2A activator) ELISA Kit人REST協(xié)阻抑因子3(RCOR3)免疫試劑盒

炭疽芽胞桿菌阿米洛結(jié)合蛋白1抗體Human PPME1 (Protein phosphatase methylesterase 1) ELISA KIT人ras同源物基因家族成員b(RHOB)免疫試劑盒

*蛹蟲草S期激活化蛋白DBF4A抗體Human PSKH1 (Serine/threonine-protein kinase H1) ELISA KIT人Q熱科克斯體2(Q fever)抗體(IgM)免疫試劑盒

離中不粘柄菌著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體Human PTH1R(PaRathyroid hormone/paRathyroid hormone-related peptide receptor) ELISA Kit人Q熱科克斯體2(Q fever)抗體(IgG)免疫試劑盒

海洋沉積物芽孢桿菌雙皮層蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白DCDC2抗體Human PARG (Poly(ADP-ribose) glycohydrolase) ELISA KIT人Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgG)免疫試劑盒

彎曲假單胞菌神經(jīng)干樹突調(diào)節(jié)蛋白DAGLα抗體Human NKAP(NF-kappa-B-activating protein) ELISA Kit人Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgA)免疫試劑盒

果生鏈核盤菌對(duì)接蛋白4抗體Human PTPRCAP (Protein tyrosine phosphatase receptor type C-associated protein) ELISA KIT人P選擇(P-Selectin/CD62P)免疫試劑盒

芽胞桿菌DULLARD蛋白抗體Human PACRGL (PACRG-like protein) ELISA KIT人P物質(zhì)受體(SP-R)免疫試劑盒

生黑鏈霉菌絲/蘇蛋白激MNB抗體Human PCID2 (PCI domain-containing protein 2) ELISA KIT人p物質(zhì)(SP)免疫試劑盒

大腸埃希菌無胸腺癥相關(guān)蛋白DGCR6/迪格爾格綜合征關(guān)鍵基因6抗體Human PELI3 (E3 ubiquitin-protein ligase pellino homolog 3) ELISA KIT人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)免疫試劑盒

蠟狀芽孢桿菌朊蛋白DPL抗體Human PDIK1L (Serine/threonine-protein kinase PDIK1L) ELISA KIT人Prominin 2(PROM2)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良蛋白激抗體Human MYH11(Myosin-11) ELISA Kit人Podocin 免疫試劑盒

粘土壤桿菌有絲分裂控制蛋白dis3抗體Human PAM (Peptidyl-glycine alpha-amidating monooxygenase) ELISA KIT人PL7抗體/抗蘇酰tRNA合成(PL7)免疫試劑盒

解鳥柔武氏菌肝癌新基因3蛋白抗體Human SLC51A (Organic solute transporter subunit alpha) ELISA KIT人PL12抗體/抗酰tRNA合成(PL12/AlaRS)免疫試劑盒

普雷恩毛霉Dapper2蛋白抗體Human PTRHD1 (Putative peptidyl-tRNA hydrolase PTRHD1) ELISA KIT人PC4,SFRS1互動(dòng)蛋白1(PSIP1)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌Dapper3蛋白抗體Human PEMT (Phosphatidylethanolamine N-methyltransferase) ELISA KIT人P53抗體免疫試劑盒

CBS228.60資源名稱: 齒孢青霉 質(zhì)量規(guī)格：1000µg/mL,基體：10%HCL囊

島生異擔(dān)子菌Heterobasidion│insulare 質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：山梨

肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格：100mg/L,基體:1%HCI補(bǔ)骨脂查爾
結(jié)晶紫-檸檬酸染色液mIgM(Human membrane IgM) ELISA Kit  人表面膜免疫球蛋白M規(guī)格： 48T

mIgD(Human membrane IgD) ELISA Kit  人表面膜免疫球蛋白D規(guī)格： 48T

KIR(Human killer cell immnoglobulin-like receptor) ELISA Kit  人殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體規(guī)格： 48T

KLR(Human killer cell lectin-like receptor) ELISA Kit  人殺傷細(xì)胞凝集su樣受體規(guī)格： 48T

APC(Human activated protein C) ELISA Kit  人活化蛋白C規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。