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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品分類：蛋白電泳
儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月
用途：配制SDS-PAGE分離膠
注意事項(xiàng)：含TRIS-HCl（pH8.8和0.4%SDS,配制使無需添加SDS溶液
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
SDS-PAGE分離膠緩沖液 | 100ml | FS-R7492 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定：
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。
1） 第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2） 根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3） 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
大腸埃希氏菌Pan ras抗體Anti-CD84 Antibody17-類固(17-KS)
解橡膠諾氏菌Patched/PTCH抗體Anti-CD86 Antibody17羥孕(17-OHP)
釀酒酵母前列腺E合成抗體Anti-CD86 Antibody(PB0237)17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)
假單胞菌屬過氧化物體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體Anti-CD8A Antibody(PB0235)17-α-羥化(17-α-OH)
腐皮鐮孢絲/蘇蛋白激Plk1抗體Anti-CD8A Antibody16α羥基雌1(16-α OHE-1)
Flavobacterium磷化絲/蘇蛋白激Plk1抗體Anti-CD9 Antibody15脂加氧(15-LO/LOX)
芽胞桿菌屬親環(huán)蛋白（親環(huán)）PPIG抗體Anti-CDA Antibody15-羥基前列腺脫氫(15-PGDH)
釀酒酵母磷化親環(huán)蛋白（親環(huán)）PPIG抗體Anti-CDC123 Antibody15-epi-氧脂 A4(15-epi-LXA4)
釀酒酵母磷化蛋白激AKT底物1抗體Anti-CDC25B Antibody14-3-3蛋白(14-3-3 pro)
Winogradskyella ulvae磷化內(nèi)分泌腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體Anti-CDC20 Antibody14-3-3 蛋白 beta/alpha(YWHAB)
吸水鏈霉菌井崗變種富含脯的酪激2抗體Anti-CDC27 Antibody12-脂氧化/脂加氧(LOX-12)
大西洋假交替單胞菌磷化富含脯的酪激2抗體Anti-CDC25C Antibody12羥二十烷四烯(12-HETE)
淡紫擬青霉磷化富含脯的酪激2抗體Anti-CDC25B Antibody(PB0510)11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)
嗜鹽動(dòng)性球菌磷化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體Anti-CDC25C Antibody11β羥類固脫氫1型(11β-HSD1)
巨大芽孢桿菌磷化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體Anti-CDC37 Antibody1,5-脫水葡萄糖/1,5-脫水山梨(1,5-AG)
鐮刀菌屬磷化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體Anti-CDC37 Antibody1,4,5-三磷肌(IP3)
刺毛殼Chaetomium│spinosum 質(zhì)量規(guī)格：0.98
膠孢Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
海洋副球菌Paracoccus│oceanense 質(zhì)量規(guī)格：0.98
SDS-PAGE分離膠緩沖液ADRB3/ Beta3-AR /FITC 熒光su標(biāo)記腎上腺su能受體β3IgG規(guī)格： 0.2ml
CD8/RBITC 羅丹明標(biāo)記CD8IgG規(guī)格： 0.2ml
AD7C/FITC 熒光su標(biāo)記神經(jīng)絲蛋白IgG規(guī)格： 0.2ml
AD7C-NTP/NTP/AF /FITC 熒光su標(biāo)記神經(jīng)絲蛋白（人）IgG規(guī)格： 0.2ml
AE3/FITC 熒光su標(biāo)記陰離子交換蛋白3IgG規(guī)格： 0.2ml
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