胰蛋白酶-EDTA溶液公司正在銷售的產品：兔鈣視網膜蛋白(CR)試劑盒Anti-BMP4 Antibody磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗體
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兔腺苷三磷酸結合盒轉運體G1(ABCG1)試劑

公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產品分類：細胞培養(yǎng)

儲存條件  —20℃,12個月

用途  又稱培養(yǎng)細胞消化液,用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化。

注意事項  無菌溶液,經過濾除菌處理。主要由胰酶或胰蛋白酶、EDTA組成,含酚紅。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。

蛋白聚糖4(PRG4)PRG4 ELISA Kit磷化自噬相關蛋白3抗體包裝5g

蛋白激B(PKB)PKB ELISA Kit縮2抗體包裝1g

蛋白激A(PKA)PKA ELISA Kit胰腺α淀粉抗體包裝25g

蛋白C(Protein C)Protein C ELISA Kit錨蛋白重復結構域蛋白11抗體包裝5g

膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)CCK ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝100mg

膽囊收縮(CCK)CCK ELISA Kit磷化活化復制因子2抗體包裝100mg

乙酰轉移(ChAT)ChAT ELISA Kit固還原家族1成員D1抗體包裝25g

磷甘油酯(PC/CPG)PC/CPG ELISA Kit肝血管生成相關蛋白抗體包裝5g

膽固酯轉移蛋白(CETP)CETP ELISA Kit自解結構域5蛋白抗體包裝25g

膽固(CH)CH ELISA Kit酰基硫酯8包裝5g

單核細胞趨化蛋白5(MCP-5)MCP-5 ELISA Kit溶血磷脂酰基轉移β抗體包裝25g

單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)MCP-4/CCL13 ELISA KitAFP4b蛋白抗體包裝5g

單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)MCP-3/CCL7 ELISA Kit載脂蛋白C2抗體包裝100g

單核細胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)MCP-2/CCL8 ELISA Kit載脂蛋白A5抗體包裝25g

單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)MCP-1 ELISA Kit載脂蛋白A2抗體包裝5g

凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）結締組織生長因子(CTGF)CGK733 是一種有效的 ATM/ATR 抑制劑，用于癌癥研究。
胰蛋白酶-EDTA溶液Cyr61/FITC  熒光標記富半胱氨肝結合蛋白61IgG聚二單 平均分子量500

Cytochrome C/FITC  熒光標記色 CIgG1-壬烯 90%

Cytochrome P450 2C19/CYP2C19 /FITC  熒光標記色P450 2C19IgG萘 閃爍純，99%

Cytochrome P450 2C9/CYP2C9 /FITC  熒光標記色P450 2C9IgG萘 AR

Cytochrome P450 2D6/CYP2D6 /FITC  熒光標記色P450 2D6IgG正辛烷 96%

CK1/8/19(Cytokeratin 1/8/19)/FITC  熒光標記角蛋白1/8/19IgG正辛烷 CP,95%

DRD1 receptor/FITC  熒光標記多巴受體-D1IgG1-辛硫 98%

DRD2 receptor/FITC  熒光標記多巴受體-D2IgG1-辛烯 98%

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。