商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義蔗糖轉(zhuǎn)化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)最適 pH,將高等植物Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)和中性轉(zhuǎn)化酶(NI)兩種類(lèi)型。 NI主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,負(fù)責(zé)分解細(xì)胞質(zhì)中蔗糖為果糖和葡萄糖。測(cè)定原理NI催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收值與還原糖生成量成正比。通過(guò)光吸收增加速率來(lái)計(jì)算NI活性自備用品可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
丹皮原苷;牡丹原甙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Wilforlide A免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體包裝25g
丹葉大黃英文名: Forsythoside E胰島樣生長(zhǎng)因子不穩(wěn)定亞基ALS抗體包裝5g
丹葉大黃-3'-O-葡萄糖苷英文名: Rotundine/ L-Tetrahydropalmatine豬胰島單克抗體包裝1g
丹芝B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: EGCG, (-)-Epigallocatechin gallate/Green Tea ExtractKB抑制蛋白激α/IκBα/IKK-α/IKKα/I-κB-α 抗體包裝5g
單白前苷B英文名: Deoxycholic acid抗重組人胰島抗體包裝5g
膽固(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Calcein-AM 磷化肌聚磷鹽磷樣蛋白1抗體包裝25g
膽紅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nicotinamide胰島受體抗體包裝5g
膽木(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: cucurbitacins胰島受體α抗體包裝1g
膽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 5-Hydroxytryptophan(5-HTP)胰島受體β抗體包裝5g
淡豆豉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 5-HydroxytryptophanKB抑制蛋白激α/β抗體包裝10mg
蛋黃磷脂酰英文名: Imazapyr acid白介12抗體包裝250mg
當(dāng)歸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Imazapyr acid干擾誘導(dǎo)35蛋白抗體包裝100ml
當(dāng)歸尾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Lithocholic Acid完整膜蛋白E25A抗體包裝1g
當(dāng)歸酰基戈米辛H(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Potassium Oxonate小腸型脂肪結(jié)合蛋白抗體包裝5g
當(dāng)歸酰基戈米辛O英文名: Potassium Oxonate胰島降解抗體包裝1g
多刺鏈霉菌Streptomyces│echinatus 質(zhì)量規(guī)格:≥90.0%,BR漢黃芩苷;Wogonoside
脫氮卓貝爾氏菌Zobellella│denitrificans 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,二合物顆粒體蛋白試劑盒黃芩;Baicalein
猴頭菌Hericium│erinaceus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品顆粒溶試劑盒黃豆黃苷; Glycitin
中性轉(zhuǎn)化酶(NI)測(cè)試盒50管/24樣*松乳菇 1-(4-基)-3-甲基-5-吡唑啉酮環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷Elisa
烏飯樹(shù)擬莖點(diǎn)霉 2,5-二溴己二酸二乙酯NADH還原Elisa
豇豆慢生根瘤 4-溴鄰苯二甲酸酐色C還原Elisa
阪崎腸桿 亞磷酸二甲酯布魯東氏酪激Elisa
淡黃曲霉 5-吡啶-2-羧酸銅鋅超氧化物歧化Elisa
黑曲霉 DL-2-甲基丁酸甲酯L-天冬氧化Elisa
裂孔平伏 2-特戊酰氨基-6-皮考啉交替氧化Elisa
菊苣假單胞 2-特戊酰基吡啶脫氫Elisa
釀酒酵母 1-萘基異酸酯V型ATPElisa
芽孢桿 5-氟-2-異亞基氨基氧苯脫氧核糖核酸Elisa
枯草芽孢桿 溴二酸二甲酯透明質(zhì)酸Elisa
釀酒酵母 鈉固氮Elisa
華根霉 3,5-二甲基-1-氫-吡咯-2-羧酸叔丁酯-4-羧酸乙酯條紋花葉病Elisa
黃傘(可訂購(gòu)) 2-溴二苯并線(xiàn)條花葉病Elisa
畢赤酵母 3,4-二肼鹽酸鹽1.6二磷酸果糖酸Elisa