化工儀器網
詳細介紹
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
Tricine加樣緩沖液 | 5ml | FS-R7478 |
產品分類：蛋白電泳
儲存條件：—20℃,12個月
用途：又稱三羥甲基甘氨酸加樣緩沖液,Tris-tricine緩沖系統的PAGE電泳
注意事項：主要由Tris-HCl、DTT、G-250等組成。
配制與標定的實驗原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。
實驗方法與判定：
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。
3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
紅色蠟蘑一種腫瘤抑制基因抗體（N端）Anti-CASP8(P10) AntibodyN端中段骨鈣(N-MID-OT)
香港洛克氏菌腺苷單磷活化蛋白激α1/AMPK α 1抗體Anti-CASP8 AntibodyN端外顯肽(Ext-N)
白僵菌維生K依賴的蛋白C重鏈抗體Anti-CASP8(P18) AntibodyN端前腦鈉(NT-proBNP)
長蠕孢菌神經叢蛋白A1抗體Anti-CASP8 AntibodyNOGO-A抗體(Nogo-A Ab)
p21激活激4抗體Anti-CASP9(small)(p10) AntibodyNOD樣受體(NLR)
Aquimonas磷化p21激活激4/5/6抗體Anti-CASP8(P18) AntibodyNADPH氧化3(NOX3/MOX2)
Microbacterium marinilacus磷化p21激活激1/2抗體Anti-CASP9(p35) AntibodyNADPH氧化1(NOX1/MOX1/NOH1)
變異鏈霉菌磷化p21激活激1/2抗體Anti-Caspase-1(P20)/CASP1 AntibodyNa+/H+交換體3(NHE3)
干草鞘單胞菌磷化p21激活激2抗體Anti-CASP9(large) AntibodyN(ε)羧乙基賴(CEL)
蠟狀芽孢桿菌磷酯Cγ2抗體Anti-Caspase-9 p35/Casp9 AntibodyMYC誘導核抗原(MINA)
枯草芽胞桿菌磷化血小板源性生長因子受體-α抗體Anti-CAST AntibodyMAX二聚化蛋白1(mxd1)
產堿普羅威登斯菌磷化血小板源性生長因子受體-α抗體Anti-CAT AntibodyMAP磷雙特異性磷1(DUSP-1)
假單胞菌P73腫瘤抑制基因抗體Anti-CAV1 AntibodyM2腎激(M2-PK)
鹽假單胞菌表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體Anti-CASR Antibody(PB0970)L選擇(L-Selectin/CD62L)
蘇云金芽孢桿菌擬步行甲亞種G蛋白偶聯受體p2y10抗體Anti-CAV2 AntibodyL-乳脫氫(L-LDH)
哈茨木霉腺苷環化激活肽-27/38抗體Anti-CAV2 Antibody(PB0108)L-解(PAL)
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規格：>98%,BR
O1群霍亂弧菌Vibrio│cholerae non-O1 質量規格：>98%,BR
堅強芽孢桿菌Bacillus│firmus Bredemann and Werner 質量規格：>98%,BR
Tricine加樣緩沖液BTK/ATK /FITC 熒光su標記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨suan激meiATKIgG規格： 0.2ml
Phospho-Btk(Tyr223) /FITC 熒光su標記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨suan激meiATKIgG規格： 0.2ml
Phospho-Btk(Ser180) /FITC 熒光su標記兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨suan激meiATKIgG規格： 0.2ml
ABCA1/FITC 熒光su標記腺三磷suan結合盒轉運體A1IgG規格： 0.2ml
Tap1/ABCB2 /FITC 熒光su標記ATP結合轉運因子1IgG規格： 0.2ml
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。
1） 第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
2） 根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3） 第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1） 轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3） 篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。
4） 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5） 之后更換正常培養基培養即可。
化工儀器網