商品介紹:
測(cè)定意義 漆酶(Laccase)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍(lán)氧化酶家族,廣泛分布于真菌和高等植物中,具有較強(qiáng)的氧化還原能力,在紙漿生物漂白,環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測(cè)方面有非常廣泛的應(yīng)用。 測(cè)定原理 漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS,測(cè)定ABTS自由基的增加速率,可計(jì)算得漆酶活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。 |
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 漆酶測(cè)試盒50管/24樣 |
檢測(cè)方法 | 可見(jiàn)分光光度法 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50管/24樣 |
產(chǎn)品貨號(hào) | AS6321354 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
Paucimonas lemoignei4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框29抗體Human KCNA4(Potassium voltage-gated channel subfamily A member 4) ELISA Kit人孕激誘導(dǎo)阻斷因子(PIBF)免疫試劑盒
芽孢桿菌屬4號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框21抗體Human Protein NDRG3(N-myc downstream-regulated gene 3 protein) ELISA Kit人孕激/孕(PROG)免疫試劑盒
豇豆慢生根瘤菌C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員C抗體Human P311(Neuronal protein 3.1) ELISA Kit人鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)抗體(IgM)免疫試劑盒
嗜熱鏈球菌CD226抗體Human TIGAR(TP53-Inducible Glycolysis and Apoptosis Regulator) ELISA Kit人鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)抗體(IgG)免疫試劑盒
新疆鹽地桿菌屬CD26抗體Human anti-CarP(anti-carbamylated protein) ELISA Kit人遠(yuǎn)端上游元件結(jié)合蛋白1(FUBP1)免疫試劑盒
桃色枝頂孢免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ/Fc γ RII a抗體Human ApoB48 ELISA Kit人原纖維蛋白-1(FBN1)免疫試劑盒
腸桿菌屬緊密連接蛋白20抗體Human ABHD1 ELISA Kit人原鈣黏1(PCDH1)免疫試劑盒
游動(dòng)球菌屬中心體蛋白135抗體Human EMP3(Epithelial membrane protein 3) ELISA Kit人魚(yú)精蛋白1(PRM1)免疫試劑盒
膠孢半胱蛋白蛋白-7抗體Human ABL2 ELISA Kit人誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒
Herbaspirillum canariense鈣調(diào)節(jié)抗體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào))Human ABT1 ELISA Kit人有絲分裂原活化蛋白激14(MAPK14)免疫試劑盒
檸檬假絲酵母1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框181抗體Human ABLIM1 ELISA Kit人游離脂肪(FFA)免疫試劑盒
*杏葉斑鏈格孢Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體(C3b/C4b受體抗體)Human ACADSB ELISA Kit人游離原卟啉(FEP)免疫試劑盒
青霉屬8型膠原/內(nèi)皮膠原蛋白抗體Human ABTB1 ELISA Kit人游離血紅蛋白(f-Hb)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體Human ACADVL ELISA Kit人游離狀腺原(Free-T3)免疫試劑盒
石面單胞菌色P450 2C9抗體Human ACBD3 ELISA Kit人游離肉堿免疫試劑盒
摩洛哥芽孢桿菌色P450 2D6抗體Human ACAP1 ELISA Kit人游離前列腺特異性抗原(fPSA)免疫試劑盒
教酒鏈霉菌Streptomyces│chartreusis 質(zhì)量規(guī)格:>70%,BSKI-67抗原試劑盒桔梗皂苷元
煙草Colletotrichum│tabacum 質(zhì)量規(guī)格:BR;溶液,Au在23.5-23.8%Jo1抗體/抗組酰tRNA合成抗體試劑盒焦袂康
: AS01資源名稱: 熱帶假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格:>96%,BRIV形膠原蛋白α3鏈試劑盒基當(dāng)藥寧
漆酶測(cè)試盒50管/24樣小卷霉 3-乙酰芐生長(zhǎng)分化因子15Elisa
涎沫假絲酵母 6-硝基喹啉生長(zhǎng)Elisa
弗雷德里克斯堡假單胞 正丁基鋰生長(zhǎng)釋放肽ghrelinElisa
大腸埃希 2-萘甲生長(zhǎng)釋放因子Elisa
Arthrobacter 羧乙基鍺倍半氧化物(GE 132)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β;黑瘤生激因子Elisa
塔賓曲霉 檸檬酸氫二鈉水合物生長(zhǎng)停滯基因6Elisa
味側(cè)耳(紫孢側(cè)耳) 碳酸鈉,十水生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43Elisa
釀酒酵母 二甲胂酸鈉 三水合物生長(zhǎng)抑Elisa
香菇 2-溴苯酸生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2Elisa
草酸青霉 乙酸鈉,三水食道癌相關(guān)基因4蛋白Elisa
枯草芽孢桿 BOC-對(duì)磺酰-D-精視黃結(jié)合蛋白Elisa
地衣芽孢桿 1-萘乙酸鈉視黃結(jié)合蛋白4Elisa
鐮刀屬 芐基化鎂嗜鉻粒蛋白AElisa
酒紅指孢囊 2-苯基喹啉嗜環(huán)蛋白;親環(huán)AElisa
毛柄(金針菇) 6-乙氧基-3-吡啶酸嗜酸性粒趨化蛋白Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。