詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | 錨蛋白重復結構域蛋白50抗體 |
英文名稱 | ANKRD50 |
規格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
抗菌肽Att英文名稱:Human Attacin, Att
顆粒溶素GNLY英文名稱:Human granulysin, GNLY
富組蛋白HTN5英文名稱:Human histatin 5, HTN5
絲狀血球凝集素FHA英文名稱:Human filamentous hemagglutinin, FHA
細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白CVL英文名稱:Human cytovillin/ezrin, CVL
嗜環蛋白/親環素ACyPA英文名稱:Human cyclophilin A, CyPA
肌養蛋白dystrophin英文名稱:Human dystrophin
膠原凝集素Collectin英文名稱:Human Collectin
伴侶蛋白10CPN10英文名稱:Human chaperonin 10, CPN10
纖調蛋白FMOD英文名稱:Human fibromodulin, FMOD
鈣網蛋白CRT英文名稱:Human Calreticulin, CRT
網膜素omentin英文名稱:Human omentin
基質γ羧基谷氨酸蛋白MGP英文名稱:Human Matrix Gla Protein, MGP
基質裂解蛋白/基質溶素MAT英文名稱:Human matrilysin, MAT
螺旋肽THP英文名稱:Human triple-helical peptide, THP
錨蛋白重復結構域蛋白50抗體綠針假單胞菌種屬: Pseudomonas chlororaphis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應用領域: 模式菌株培養基: 0002生長條件: 26℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Pasteurla multocida分離基物: 巴氏桿菌病鴨提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 科研及血清定型培養基: 56生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;
Gymnopilus junonius (Fr.) P.D. Orton分離基物: 子實體提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 14生長條件: 28存儲條件: 定期移植法
Bacillus senatarsenatis分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養物模式菌株: no應用領域: 近海細菌培養基: 471生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Debaryomyces hansenii分離基物: 水樣/海水提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 極地酵母培養基: 513生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法
Papularia sp.分離基物: 植物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 0014生長條件: 18-26℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Klebsila pneumoniae分離基物: 土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 33生長條件: 50℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他
Bacillus sp.分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養物模式菌株: no應用領域: 近海細菌培養基: 471生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Bacillus indicus分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質篩選; 4.海洋微生物生態學研究。培養基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法