詳細介紹
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
Tris-甘氨酸電泳緩沖液 | 500ml | FS-R7487 |
產品分類:蛋白電泳
儲存條件:室溫,12個月
用途:常用電泳緩沖液,尤其適用于SDS-PAGE電泳
注意事項:主要由Tris、甘氨酸、SDS等組成
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
灰樹花磷化血小板源性生長因子受體αAnti-CD209 AntibodyAgouti相關蛋白(AGRP)
果蠅克魯維酵母兒茶氧化PPO抗體Anti-CD24 AntibodyAFG3樣蛋白2(AFG3L2)
云芝蛋白激C抗體Anti-CD244 AntibodyAdropin(ENHO)
白囊耙齒菌脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體Anti-CD244 AntibodyADP-核糖基化因子5(ARF5)
王氏薄孔菌多聚腺苷結合蛋白抗體Anti-CD274 AntibodyADP-核糖基化因子4(ARF4)
焦瑞身氏溶桿菌核纖層蛋白A相關結構蛋白1抗體Anti-CD274 AntibodyADAM金屬肽含血小板反應蛋白1基元4(ADAMTS4)
冷彎曲菌PCID2蛋白抗體Anti-CD2AP AntibodyⅣ型前膠原肽(PⅣNP)
三葉草根瘤菌腺苷硫激1抗體Anti-CD27 Antibody(PB0974)Ⅳ型前膠原基末端肽(PⅣNP)
謝瓦散囊菌腺苷硫激2抗體Anti-CD2AP AntibodyⅣ型膠原(Col Ⅳ)
Winogradskyella multivorans 蛋白激活受體3抗體Anti-CD274 AntibodyⅣ型膠原(Ⅳ-C)
黑曲霉MAWD結合蛋白抗體Anti-CD274 AntibodyⅢ型前膠原肽(PⅢP)
蠟樣芽孢桿菌PCID1蛋白抗體Anti-CD2AP AntibodyⅢ型前膠原肽(PⅢNP)
黑姬菇PDZ結構域PDZK6蛋白抗體Anti-CD30/TNFRSF8 AntibodyⅢ型前膠原基末端肽(PⅢNP)
白橙蓋鵝膏菌吡哆激抗體Anti-CD33 AntibodyⅢ型前膠原基端肽(PⅢNT)
黃溶鏈霉菌PDZ結構域PDZK1蛋白抗體Anti-CD34 AntibodyⅢ型前膠原C端肽(PⅢCP)
Sphingomonas yunnanensis前列腺癌激活蛋白抗體Anti-CD33 Antibody(PB0975)Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規格:>98%,BR
: AS1.196資源名稱: 蠟狀芽孢桿菌 質量規格:>98%,BR
白假絲酵母Candida│albicans 質量規格:>98%(T),BR
Tris-甘氨酸電泳緩沖液ADAM-TS7/FITC 熒光su標記整合su樣金屬蛋白mei與凝血mei1型-7IgG規格: 0.2ml
14-3-3 family protein/FITC 熒光su標記植物14-3-3蛋白IgG規格: 0.2ml
ADAM-TS7/FITC 熒光su標記兔抗人、大、小鼠整合su樣金屬蛋白mei與凝血mei1型-7(N端)IgG規格: 0.2ml
ADAM-TS12/FITC 熒光su標記整合su樣金屬蛋白mei與凝血mei1型-12IgG規格: 0.2ml
ACV-A/FITC 熒光su標記活化suAIgG規格: 0.2ml
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。