詳細介紹
產品分類:培養基
儲存條件 —20℃,12個月
用途 哺乳動物細胞培養中培養基的添加劑
注意事項 無菌溶液。按培養基:谷氨酸溶液=50:1使用,注意避免反復凍融,經過濾除菌。由于谷氨酸溶解度較低,因此需要40~50℃溫水助溶,分裝后使用。
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
L-谷氨酸溶液 | 100ml | FS-R6450 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
谷半胱連接催化亞基(GCLC)GCLC ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白11抗體包裝500mg
谷半胱連接(GCLM)GCLM ELISA Kit中心體蛋白55kDa抗體包裝5ml
孤啡肽(OFQ)OFQ ELISA Kit富含半胱與表皮生長因子樣蛋白2抗體包裝1g
高鐵血紅蛋白還原(MHBR)MHBR ELISA Kit骨架相關蛋白2/腫瘤和微管相關蛋白抗體包裝5g
高遷移率族蛋白1(HMG1)HMG1 ELISA Kit染色質修飾蛋白4B(4C)抗體包裝1g
高密度脂蛋白(HDL)HDL ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝250mg
高分子量激肽原(HMWK)HMWK ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝1g
高爾基蛋白73(GP73)GP73 ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝5g
干細胞因子受體(SCFR)SCFR ELISA Kit酪蛋白激1γ2抗體包裝10MG
干細胞因子(SCF)SCF ELISA Kit柯薩奇病蛋白受體B抗體包裝100g
干擾誘導T-細胞α亞族趨化劑(ITαC)ITαC ELISA Kit腫瘤抑制因子FBW7抗體包裝25g
干擾調節因子3(IRF3)IRF3 ELISA Kit粘附分子4抗體包裝5g
干擾γ誘導單核因子(MIγ)MIγ ELISA Kit鈣調蛋白結合轉錄激活因子1抗體包裝10g
干擾γ(IFNγ)IFNγ ELISA Kit周期依賴性激5激活結合蛋白C53抗體包裝5g
干擾β(IFNβ)IFNβ ELISA Kit著絲粒蛋白H抗體包裝1g
中甸隔指孢Dactylella│zhongdianensis 質量規格:>99%,BR載脂蛋白C3試劑盒乙酰蒲公英萜;Taraxeryl ac
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質量規格:HPLC>98%,標準品載脂蛋白C2試劑盒異古倫賓;IsocoluMbin
暫未定名Cystofilobasidium│infirmominiatum 質量規格:進分,Sigma C1768載脂蛋白C1試劑盒;6-Hydroxyindole
L-谷氨酸溶液IAA/FITC 熒光標記-3-/植物生長IgG3-(3,4-二氧苯) 98%
IAA/FITC 熒光標記-3-/植物生長單克隆IgG地布
IASPP/FITC 熒光標IASPP蛋白IgG地布
Iba-1/FITC 熒光標記離子鈣接頭蛋白IgG2-羥丁鈉 97%
ICAD/FITC 熒光標記Caspase 激活的脫氧核糖核抑制劑IgG3--3-氧雜環丁烷 97%
ICAM-1(CD54)/FITC 熒光標記間粘附分子-1IgG鄰苯二酰肼 99%
CD54/ICAM-1/Biotin 生物標記間粘附分子-1IgG1-苯哌 97%
ICAM-3/CD50/FITC 熒光標記間粘附分子-3IgG2-吡啶 99%