商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義: 支鏈淀粉是具有高度分支的多糖,淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例和含量對(duì)淀粉產(chǎn)品的加工、物化特性、糊化溫度等有著直接的影響,對(duì)于不同比例直、支鏈淀粉的淀粉的研究具有重要的意義。 測(cè)定原理: 利用80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開(kāi),利用雙波長(zhǎng)比色法測(cè)定支鏈淀粉含量。 需自備的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
鷓鴣菜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: DL-Alanyl-DL-norvalineHERC4 E3泛蛋白連接抗體包裝250mg
珍珠(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 3-(1-Naphthyl)-L-alanineHERC6 E3泛蛋白連接抗體包裝5g
珍珠母(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Fmoc-3-(2-Naphthyl)-D-alanineMMF誘導(dǎo)片段蛋白1抗體包裝1g
正丁基酞;丁基酞內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Citrulline HERPUD蛋白家族成員2抗體包裝25g
正二十九烷英文名: Fmoc-L-Citrulline尿黑氧化抗體包裝5g
芝麻林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Boc-L-β-homoalanine肝生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子酪激底物抗體包裝1g
芝麻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Boc-L-?-homoaspartic acid 5-benzyl esterT2識(shí)別黑色瘤抗原抗體包裝250mg
知母(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Fmoc-β-homoaspartic acid肝癌HHCM蛋白抗體包裝5g
知母皂苷A1英文名: Fmoc-L-β-Homoglutamic acid 6-tert-butyl ester紫外切除修復(fù)蛋白R(shí)AD23A抗體包裝1g
知母皂苷A3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: H-HomoArg-OH紫外切除修復(fù)蛋白R(shí)AD23B抗體包裝250mg
知母皂苷BII(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Hydroxyproline3-羥基異丁脫氫抗體包裝100g
知母皂苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-HydroxyprolineHib乙酰解抗體包裝25g
梔子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Norleucine腫瘤異常基化蛋白1抗體包裝500g
蜘蛛香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Fmoc-4-iodo-D-Phe-OH腫瘤異常基化蛋白2抗體包裝25mg
植(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 3,5-Diiodo-L-tyrosine缺氧誘導(dǎo)因子脯酰羥化4抗體包裝1g
乳乳球菌Lactococcus lactis 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)流行性腦脊髓膜炎抗體試劑盒金合歡;Acacetin
克雷伯氏菌Klebsiella│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品流感病抗體IgG試劑盒;D(-)-Tartaric ac
乳乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格:>98%流感B病抗體IgG ;Formic acid
支鏈淀粉含量測(cè)試盒50管/48樣圍小叢殼扁圓變種 1-Boc-4-甲酸壁降解Elisa
栗疫 BOC-D-脯氨色Elisa
新城疫病 2,4,6-氧基苯甲半纖維Elisa
尖鐮孢古巴專化型 2,4-二-5-氟查爾酮合成Elisa
玫瑰色紅球 三硫酮脂肪氧化Elisa
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 (S)-3-氨基-3-苯基油菜內(nèi)酯Elisa
Rhizobium multihospitium 2--3-吡啶總Elisa
黑曲霉 2-乙烯基萘生物堿Elisa
產(chǎn)氣莢膜梭 D型 5-氟-2-(三氟甲基)苯葡萄糖氧化Elisa
隆紋黑蛋巢 N-[(S)-(+)-1-(乙氧羰基)-3-苯基]-L-糞卟啉原ⅢElisa
Rhizobium alkalisoli 5--3-甲熱休克蛋白70Elisa
節(jié)桿 N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3,5-二鈉鹽(MAOS)熱休克轉(zhuǎn)錄因子Elisa
所多瑪鹽紅 N-乙基-N-(2-羥基-3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽二水合物雪花蓮凝集Elisa
山梨木糖假絲酵母 BOC-L-色氨游離蛋白Elisa
陽(yáng)還原地桿 NA-酸酐有機(jī)磷Elisa