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詳細介紹
商品屬性：
產品名稱 | 磷脂酶D(PLD)測試盒50管/48樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
產品規格 | 50管/48樣 |
產品貨號 | AS6321192 |
商品介紹：
測定意義 磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰膽堿水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動植物和細菌等多種生物體中，具有參與細胞脂質代謝、信號傳導、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。 測定原理 磷脂酶D催化水解磷脂酰膽堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽堿，膽堿在膽堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安替bi林和重蒸酚氧化成粉紅色物質，在500nm處有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，無水乙醇。 |
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；試劑一：液體10 mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存；試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑五：液體3.6mL×1瓶，4 ℃保存；試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取：
1、血清（漿）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（漿）體積（ml）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照血清（漿）體積（ml）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照組織質量（g）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照組織質量（g）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 3、細胞或細菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：酸性 提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml酸性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：堿 性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml堿性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 |
ADH測定操作：
1. 分光光度計預熱30 min，調節波長到340 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。
注意：空白管只需測定一次。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
偽金絲桃英文名： D-Ribose 5-phosphate disodium salt hydrate組受體H1抗體包裝1g
偽原(標準品)英文名： Hematoxylin同源盒蛋白HOXA9抗體包裝5g
委陵菜（標準品）英文名： Adenosine 5‘-monophosphate sodium salt同源盒蛋白HOXB5抗體包裝1g
衛矛堿英文名： CTP.Na2肝粘附分子抗體包裝25g
文多靈(標準品）英文名： 5-Methyluridine磷化組蛋白去乙酰化5抗體包裝5g
烏金苷（標準品）英文名： 2,2'-O-Cyclouridine磷化組蛋白去乙酰化1抗體包裝5g
烏靈菌粉（標準品）英文名： X-gal磷化組蛋白去乙酰化2抗體包裝1g
烏梅（標準品）英文名： Fluorescamine磷化HOMER3蛋白抗體包裝25g
烏梢蛇（標準品）英文名： 4-Chloro-1-naphthol (4-CN)轉化蛋白p21抗體（原癌基因H-ras抗體）包裝5g
（標準品）英文名： Avidin from egg white轉錄因子HES-1抗體包裝100g
英文名： Streptavidin from Streptomyces avidinii組蛋白H4-K4基轉移抗體包裝25g
內酯（標準品）英文名： Sitafloxacin HydrateHOMER3蛋白抗體包裝5g
內酯英文名： DHBS磷化HER3受體抗體包裝10KU
烏賊墨（標準品）英文名： Disodium beta-glycerophosphate pentahydrate磷化HER4抗體包裝250mg
吳茱萸（標準品）英文名： Fura 2-AM磷化HER4抗體包裝100g
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質量規格：>95%,BR免白M試劑盒血平;Alserin
AS3.381資源名稱: 米曲霉 質量規格：>98%,BR免疫球蛋白j鏈試劑盒硫長春質堿;Catharanthine
: ivcas7.01200資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質量規格：>98%,標準品免疫球蛋白G4試劑盒蓮心堿;Liensinine
磷脂酶D(PLD)測試盒50管/48樣動物雙歧桿 對甲苯酰核糖核酸A1Elisa
巴氏醋桿羅旺亞種 1,1'-雙(二-叔丁基膦基)二茂鐵尿苷二磷酸葡萄糖酸轉移Elisa
光帽磷傘 3-硝基芐高爾基體膜蛋白Elisa
芽胞桿 3-乙氧基烯酸復合型表皮生長因子樣結構域蛋白8Elisa
尖鐮孢黃瓜專化型（黃瓜枯萎病） 2-(1-萘基)-5-苯基噁唑低密度脂蛋白受體相關蛋白2Elisa
多布克魯維酵母 3,4-二氨基血紅蛋白β亞基Elisa
白僵 3-甲酯跨膜受體蛋白Notch-2Elisa
樟疫霉 4-芐氧基-3-苯酸Ⅴ型膠原α2Elisa
醋化醋桿 3-溴甲酯LINGO1Elisa
釀酒酵母 3,5-二溴O-連鎖-N-乙酰葡糖基轉移Elisa
檸檬兩面神 2--4-氟-5-DNA甲基轉移3LElisa
熱線鏈霉 4-基-3-氟苯酸口腔癌致病基因BPIFB2Elisa
膠孢 3-(丁基苯氨基)錨蛋白Elisa
小孢擬棘殼孢 5,7-二氟-1-印酮脫氫3家族成員A1Elisa
沉積物假海源桿 環烷酸鈣腎小管間質腎炎抗原Elisa
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