公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
PDA瓊脂培養(yǎng)基 | 500ml | FS-R6472 |
產(chǎn)品分類:培養(yǎng)基
儲存條件:4℃,6個月
用途:多用于食用菌菌種的分離培養(yǎng)
注意事項:無菌溶液。主要由20%馬鈴薯、葡萄糖、2%瓊脂等組成,經(jīng)15psi高壓滅菌30min,室溫下成膠胨狀。
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
Sestrin3蛋白(SESN3)SESN3 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框15抗體包裝1g
Sestrin2蛋白(SESN2)SESN2 ELISA Kit載脂蛋白A1抗體包裝250mg
Sestrin1蛋白(SESN1)SESN1 ELISA Kit抑癌基因p14抗體包裝100g
S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)S100B ELISA Kit抑癌基因p16抗體包裝25g
S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)S100A9 ELISA KitP27抗體/周期依賴激抑制劑包裝500g
S100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)S100A8 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框171抗體包裝10MG
S100鈣結(jié)合蛋白A7(S100A7)S100A7 ELISA Kit20號染色體開放閱讀框177抗體包裝1g
S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)S100A6 ELISA KitCD244抗體包裝100g
S100鈣結(jié)合蛋白A4(S100A4)S100A4 ELISA Kit巨噬炎性蛋白1α抗體包裝25g
S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)S100A11 ELISA Kit巨噬炎性蛋白19抗體包裝5g
S100鈣結(jié)合蛋白A10(S100A10)S100A10 ELISA Kit色P450 3A4抗體包裝100g
S100鈣結(jié)合蛋白(S100)S100 ELISA Kit角蛋白6抗體包裝25g
R-型電壓依賴鈣離子通道α1E亞基(CACNα1E)CACNα1E ELISA Kit角蛋白7抗體包裝5g
R-脊椎蛋白1(RSPO1)RSPO1 ELISA Kit磷化角蛋白17抗體包裝100g
Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2)RUNX2 ELISA Kit卷曲螺旋域蛋白質(zhì)85C抗體包裝25g
鐮孢屬Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品異鎖鏈試劑盒3-乙南楝屬二酯;Cabralea
多粘類芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格:>98%異檸檬脫氫試劑盒乙酰基二氫味草 A;Acetyldi
發(fā)酵放線纖絲菌Actinotalea│fermentans 質(zhì)量規(guī)格:>96%異常凝血原試劑盒羽扇烯;Lupenone
PDA瓊脂培養(yǎng)基phospho-IRS1(Ser11)/FITC 熒光標記化胰島受體底物-1IgG3-氧烯酯 95%
phospho-IRS1(Ser302) /FITC 熒光標記化胰島受體底物-1IgG酰酯 GR,99.5%
phospho-IRS1(Ser332/336)/FITC 熒光標記化胰島受體底物-1IgG壬 GR
phospho-IRS1(Ser612)/FITC 熒光標記化胰島受體底物-1IgG對特辛(POP) 97%
phospho-IRS1(Ser636/639) /FITC 熒光標記化胰島受體底物-1IgG4-吡啶 98%
phospho-IRS1(Ser789)/FITC 熒光標記化胰島受體底物-1IgG1,5-戊二 97%
IRS-2/FITC 熒光標記胰島受體底物-2IgG酐 98%
IRS-3/FITC 熒光標記胰島受體底物-3IgG化 ACS, ≥99.0%
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。