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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
壯觀/奇霉素溶液 | 10ml | FS-R6346 |
產(chǎn)品分類:抗生素
儲存條件 —20℃,避光,12個月
用途 氨基糖苷的抗菌素,與細(xì)菌的30S核蛋白體結(jié)合而阻礙蛋白質(zhì)的生物合成
注意事項(xiàng) 經(jīng)無菌處理。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
缺血修飾白蛋白(IMA)IMA ELISA Kit絲抑制蛋白激C底物抗體包裝1g
醛固(ALD)ALD ELISA Kit核突觸蛋白α抗體包裝5g
全段狀旁腺(i-PTH)i-PTH ELISA Kit自噬相關(guān)蛋白4B抗體包裝500g
去腎上腺(NE)NE ELISA Kit整合樣金屬蛋白與凝血1型-12抗體包裝10MG
去腎上腺(NA)NA ELISA Kitα-輔肌動蛋白4(內(nèi)參)抗體包裝1g
趨化因子配體1(CCL1)CCL1 ELISA Kit堿性磷抗體包裝250mg
趨化因子5(CCL5/RANTES)CCL5/RANTES ELISA KitAU1 tag標(biāo)簽抗體包裝100g
趨化因子(fractalkine/CX3CL1)fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit脂肪增強(qiáng)結(jié)合蛋白1包裝25g
趨化因子(FK)FK ELISA Kit蛋白激B包裝5g
趨化因子(CC基序)配體2(MRC2)MRC2 ELISA Kit蛋白激B包裝100g
羥脯(Hyp)Hyp ELISA Kit血管生成樣蛋白2抗體包裝25g
羥基戊二單酰還原(HMG-CoAR)HMG-CoAR ELISA Kit血管生成3/血管生成4抗體包裝5g
羥基戊二單酰(HMG-CoA)HMG-CoA ELISA Kit膜粘連蛋白 I抗體包裝100ml
前心鈉肽(Pro-ANP)Pro-ANP ELISA Kit膜粘連蛋白 Ⅱ抗體包裝500ml
前列腺特異性抗原(PSA)PSA ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝1g
雙鏈RNA腺苷脫基抗體(N端)免疫球蛋白M(IgM)CAL-101 (Idelalisib, GS-1101) is a selective p110δ inhibitor with IC50 of 2.5 nM
壯觀/奇霉素溶液C-erbB-4/HER4/erbB-4 /FITC 熒光標(biāo)記c-erbB-4癌因IgG雞蛋白蛋白 90%
Phospho-HER4 (Tyr984) /FITC 熒光標(biāo)記化HER4IgG過氧化氫 3500 units/mg
c-fos/FITC 熒光標(biāo)記即刻早期因(原癌因)IgG纖維(粉末) 1萬U/g
Phospho-c-Fos (Ser32) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化c-fosIgG纖維(液體) 2.5萬U/ml
Phospho-c-Fos (Thr232) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化c-fosIgG過氧化氫 2萬units/mg
Phospho-c-Fos (Thr325) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化c-fosIgG過氧化氫 3.5萬units/mg
CFTR/FITC 熒光標(biāo)記囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子IgG葡萄糖氧化 150-180U/mg
CGA/FITC 熒光標(biāo)記嗜鉻粒AIgG葡萄糖氧化 0U/mg
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。