Hoechst33342/PI細(xì)胞凋亡染色試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠酮酸脫氫酶磷酸酶(PDP)試劑盒Anti-LGALS1 Antibody內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白UNC93B抗體
豚鼠前動(dòng)力蛋白受體1(PKR1)試劑盒Anti-LEPR Antibody神經(jīng)突起誘導(dǎo)因子受體UNC5B抗體
豚鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)試劑盒 Anti-LEP Antibody神經(jīng)突起生長(zhǎng)誘導(dǎo)因子受體UNC5B

產(chǎn)品分類：細(xì)胞染色

儲(chǔ)存條件：—20℃,避光,12個(gè)月

用途：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死

注意事項(xiàng)：Hoechst33342是一種熒光染料,可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Propidium Iodide簡(jiǎn)稱PI,又稱碘化丙啶,對(duì)人體有刺激性。Hoechst33342能被活細(xì)胞攝取,與DNA結(jié)合,在紫外線下呈藍(lán)色熒光。PI使死細(xì)胞著色產(chǎn)生紅色熒光。在散點(diǎn)圖上結(jié)果為：正常細(xì)胞呈低藍(lán)/紅光,凋亡細(xì)胞呈高藍(lán)/低紅光,壞死細(xì)胞呈低藍(lán)/高紅光。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

 

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

崗松（標(biāo)準(zhǔn)品） Dimethyl sulfoxide富含亮跨膜纖連蛋白1抗體包裝10mg

杠柳次苷 N-N-Dimethylacetamide富含亮跨膜纖連蛋白2抗體包裝50mg

杠柳苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Glycerol in water for HPLC verification富含亮跨膜纖連蛋白3抗體包裝100ml

杠柳苷元;杠柳苷元;無杠柳苷苷元 IPC-DTMA-Cl牛纖維蛋白原抗體包裝100g

杠柳寡糖B IPC-DBAA (ca. 0.5mol/L in Water)FAM172A蛋白抗體包裝500g

杠柳寡糖C IPC-DPAA (ca. 0.5mol/L in Water)磷化粘著斑激抗體包裝5g

高車前苷 IPC-DAAA (ca. 0.5mol/L in Water)磷化粘著斑激抗體包裝25g

高車前 IPC-DHAA (ca. 0.5mol/L in Water)磷化脆性組三聯(lián)體抗體包裝5g

高麗紅參（標(biāo)準(zhǔn)品） IPC-ALKS-8磷化FRA-1蛋白抗體包裝1g

高麗槐(標(biāo)準(zhǔn)品) IPC-ALKS-9磷化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝25g

高良姜（標(biāo)準(zhǔn)品） IPC-ALKS-10磷化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體包裝5g

高良姜(標(biāo)準(zhǔn)品） IPC-ALKS-11磷化叉頭蛋白家族抗體包裝1g

(標(biāo)準(zhǔn)品） IPC-ALKS-12磷化叉頭蛋白3A抗體包裝5g

高山紅景天（標(biāo)準(zhǔn)品） IPC-ALKS-13磷化叉頭蛋白3A抗體包裝1g

高烏（標(biāo)準(zhǔn)品） IPC-SDS磷化叉頭蛋白3A抗體包裝5g

ACAM34=ACM3107=ATCC49239=CIP105334=DSM50資源名稱: 湖淵鹽紅菌 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%腮腺炎病IgG 去氫二異丁香;Dehydrodiiso

: JCM10272=ATCC700843=DSM15395=BCRC80020=CIP105983=IFO16685=NBRC16685資源名稱: Roseivivaxhalodurans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品軟骨糖蛋白39試劑盒氫高烏;Lappaconitin

托姆青霉Penicillium│thomii 質(zhì)量規(guī)格：>95%軟骨寡聚蛋白試劑盒羥基檸檬;Hydroxycitric
Hoechst33342/PI細(xì)胞凋亡染色試劑盒HGF(hepatocyte growth factor)  肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子抗原規(guī)格： 0.5mg

HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P)  人類皰疹病毒8抗原規(guī)格： 0.5mg

HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P)  人類皰疹病毒8抗原規(guī)格： 0.5mg

HHV8/ORF K2(Human herpesvirus 8 type P)  人類皰疹病毒8抗原規(guī)格： 0.5mg

HIF-1 Beta/ARNT1(Hypoxia-inducible factor-1 Beta)  缺氧誘導(dǎo)因子1β 抗原規(guī)格： 0.5mg