詳細介紹
產品分類:細胞組分分離
儲存條件:4℃,6個月
用途:酵母細胞中分離質膜
注意事項:主要由0.4M蔗糖、2mmM EDTA、25mM咪唑組成。
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
蔗糖咪唑溶液 | 100ml | FS-R6525 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
布林佐(標準品) Axitinib胱抗體包裝5g
(標準品) Azaperone胰凝乳蛋白B抗體包裝1g
;丁氧(標準品) Azasetron HCl補體C1q腫瘤壞死因子相關蛋白2抗體包裝5g
草(標準品) Azelastine base 分化促進因子77抗體包裝25g
草依地普侖/草(標準品) Bacitracin Zinc 半胱蛋白抑制劑樣蛋白1抗體包裝5g
茶海明(標準品) Benazepril HydrochlorideCTBS蛋白抗體包裝25g
蟾它靈(標準品) Benazepril Hydrochloride硫軟骨β1/β-1,4-GalNAc-T抗體包裝5g
蟾酥;華蟾酥基;華蟾精(標準品) Bezafibrate硫軟骨聚合3抗體包裝25g
長春(標準品) Bezafibrate胎盤催乳1/2抗體包裝5g
長春(標準品) Blonanserin酪激C-SRC抗體包裝25g
長春質堿(標準品) Brivudine磷化酪激C-SRC抗體包裝5g
朝藿定B(標準品) Brivudine酪蛋白激1/casein kinase Iα抗體包裝1g
赤蘚紅(標準品) Cabazitaxel半胱延伸蛋白α抗體包裝1g
醋己鋅(標準品) Mitoxantrone磺基轉移CSPS抗體包裝100g
醋谷/乙酰谷酰(標準品) Lamotrigine富含半胱蛋白2抗體包裝25g
猴頭菇99Hericium erinaceus 質量規格:>99.0%,BR,可用于培養血管緊張1-7試劑盒;Thymopentin
傳染性支氣管炎病毒Coronavirus│Infectious bronchitis virus 質量規格:HPLC>98%,標準品血管活性腸肽試劑盒細辛脂;(-)-asarinin
東京根霉Rhizopus│tonkinensis 質量規格:>95%,BR血管動蛋白試劑盒仙鶴草B;agrimol B
蔗糖咪唑溶液Neuro D/FITC 熒光標記抗神經源分化因子IgG3,4-二溴苯 99%
Neurofascin-155/FITC 熒光標記神經束蛋白-155IgG丁酰酯 97%
NF2/merlin /FITC 熒光標記2型神經纖維瘤IgG異丁葉酯 97%
NF-66/a-Internexin/FITC 熒光標記α-中連蛋白IgG3-羥-2-硝吡啶 98.0 %
NFAM1/CNAIP/FITC 熒光標記NFAM1IgG一酯 99%
NFATc1/FITC 熒光標記活化T核因子1蛋白IgG2,3-吡啶二羧酐 98%
NFBD1/MDC1/FITC 熒光標記DNA損傷關卡蛋白1IgG1-烯咪唑 99%
p-NFATc2/FITC 熒光標記化NFATc2IgG2-氨-5-溴吡啶 98%