詳細介紹
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
IEF電極緩沖液 | 2×500ml | FS-R7506 |
產品分類:蛋白電泳
儲存條件:室溫,12個月
用途:蛋白質組學電泳
注意事項:含陽極緩沖液和陰極緩沖液各一瓶,5倍稀釋后使用。
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
大洋芽孢桿菌腎/血管緊張形成Ren1抗體Anti-CSK Antibody(PB0129)轉鈷蛋白Ⅰ(TCN1)
枯草芽孢桿菌分泌性蛋白RSPO1抗體Anti-CST3 Antibody轉谷酰7(TGM7)
死亡谷芽孢桿菌RAS的GTP激活蛋白抗體Anti-CST3 Antibody轉谷酰6(TGM6)
異常威克漢姆酵母G蛋白P21 RAC2抗體Anti-CSTA Antibody轉谷酰5(TGM5)
玉蜀黍赤霉(麥類赤霉病菌)GTP結合蛋白RAC1+RAC2抗體Anti-CSTA Antibody筑絲蛋白5(TEKT5)
裂褶菌ras癌基因家族Rab8蛋白/原癌基因c MEL抗體Anti-CSTB Antibody筑絲蛋白4(TEKT4)
大孢長根菇ras癌基因家族Rab2抗體Anti-CSTA Antibody筑絲蛋白3(TEKT3)
苛求芽胞桿菌ras癌基因家族Rab3a抗體Anti-CSTB Antibody筑絲蛋白1(TEKT1)
解葡聚糖微桿菌ras癌基因家族Rab9蛋白抗體Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody主要堿性蛋白(MBP)
紅褐肉座菌ras癌基因家族RAB20抗體Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody蛛受體3(LPHN3)
蘋果黑腐皮殼菌Ras樣蛋白A+B抗體Anti-CSTB Antibody蛛受體2(LPHN2)
綠色木霉Rad51抗體Anti-CTAG1A Antibody蛛受體1(LPHN1)
黃絮鱗鵝膏菌RNA結合蛋白片段Y染色體家族蛋白2抗體Anti-CTBP1 Antibody肘臀蛋白(CUBN)
茄勞爾氏菌RNA結合蛋白片段Y染色體家族蛋白1抗體Anti-CTBP1 Antibody(PB0400)軸突生長誘向因子G2(NtnG2)
無花果曲霉變種RNA聚合III抗體Anti-CTBP2 Antibody(PB0401)軸突生長誘向因子G1(NtnG1)
土生類諾氏菌磷化原癌基因c-Met相關酪激抗體Anti-CTCF Antibody軸突生長誘向因子5(Ntn5)
平菇Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm. 質量規格:0.99
紅緣層孔菌Fomes│pinicola (Sw.) Fr. 質量規格:0.98
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質量規格:0.98
IEF電極緩沖液Apaf-1 /FITC 熒光su標記凋亡蛋白活性因子-1(C端)IgG規格: 0.2ml
Apaf-1/FITC 熒光su標記凋亡蛋白活性因子-1(N端)IgG規格: 0.2ml
Protein C/FITC 熒光su標記APC活化蛋白CIgG規格: 0.2ml
Apelin/FITC 熒光su標記脂肪炎癥因子ApelinIgG規格: 0.2ml
Apelin receptor/APJ receptor /FITC 熒光su標記Apelin receptorIgG規格: 0.2ml
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。