公司產(chǎn)品僅供科研使用:
商品介紹:
商品介紹 測(cè)定意義: α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān),而且與細(xì)胞識(shí)別和一些信號(hào)分子產(chǎn)生密切相關(guān)。 測(cè)定原理: α-GC分解對(duì)-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算α-GC活性。 自備用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
常見樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液) ,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:雙試劑,直接操作,快速、簡(jiǎn)便。
2、取樣量微:需要的樣本量是羥胺法的1/10。
3、靈敏度高:檢測(cè)線0.5U/ml,是羥胺法5倍,鄰苯三酚法的200倍
4、穩(wěn)定性好:批內(nèi)CV=5.50%,批間CV=3.32%,試劑盒2~8℃存放3個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.2%。6、回收試驗(yàn): X =102.3%。7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。且特異性強(qiáng),不受類SOD物質(zhì)的干擾8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
老鸛草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Antipain dihydrochloride富含亮重復(fù)神經(jīng)元5抗體包裝100g
老鶴草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-(+)-FUCOSE親脂性蛋白B抗體包裝25g
老龍皮;網(wǎng)脊衣 A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: N-Acetyl-DL-Serine癌癥亮鏈下調(diào)因子1抗體包裝500g
老蛇蓮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Zeatin賴酰氧化相關(guān)蛋白2抗體包裝100mg
酪(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Silymarin基膜聚糖蛋白抗體包裝500mg
雷內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Silymarin李斯特菌溶胞抗體包裝1g
春堿英文名: Ferritin亮羧基轉(zhuǎn)移1抗體包裝250mg
次堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Chenodeoxycholic acid原癌基因2抗體包裝5g
定堿英文名: Chenodeoxycholic acid賴酰氧化樣蛋白4抗體包裝1g
紅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: INSULIN乳鐵蛋白抗體包裝25g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: INSULIN層粘連蛋白1+2抗體包裝5g
晉堿英文名: L-Aspartate Potassium富含亮重復(fù)蛋白15抗體包裝1g
內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Coenzyme Q10,Ubiquinone受體蛋白酪磷F抗體包裝250mg
內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Coenzyme Q10磷化5-脂氧合抗體包裝5g
寧堿A英文名: vitamin A acetate低分子質(zhì)量蛋白2抗體包裝1g
枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus│subtilis subsp. subtilis 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定抗麥膠蛋白抗體試劑盒二氫魚藤;dihydrorotenon
: A160資源名稱: 黃直絲鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:BS抗麥膠蛋白試劑盒二氫石蒜堿;Dihydrolycorin
平菇Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm. 質(zhì)量規(guī)格:BS抗卵子抗體二氫黃連堿;
α葡萄糖苷酶(α GC)測(cè)試盒100管/48樣羊毛狀青霉 醋酸鈰水合物紅色葉綠降解產(chǎn)物還原Elisa
粘質(zhì)沙雷氏 3-叔丁基苯脫氫抗壞血酸還原Elisa
湖泊微桿 3-甲苯肼氧化還原Elisa
缺陷假單胞 亞酰苯二磷酸鳥苷Elisa
新月彎孢 3-氨基-4-羥基甲酯一磷酸鳥苷Elisa
枯草芽孢桿 2-甲基-3-噻吩甲酸甲酯蘋果莖溝病Elisa
溶血隱秘桿 4--2-甲番茄紅Elisa
慢生根瘤 4,5-二甲基-2-巰基噻唑纖維二糖水解Elisa
四川散斑殼 4-(溴乙酰基)吡啶氫鹽蔗糖轉(zhuǎn)化Elisa
中國(guó)擬迷孔 4,7-雙(5-溴-2-噻吩基)-2,1,3-苯并硒二唑木糖Elisa
波蘭青霉 鄰硫脲木聚糖酯Elisa
酮叢毛單胞 甲基磺酸錫纖維二糖水解Elisa
日本根霉 1H--1-核苷二磷酸激AElisa
香菇 四氫吡喃-4-甲酸核苷二磷酸激AElisa
耐熱芽孢芽孢桿 N,N,2,2-四甲基-1,3-二6-磷酸山梨脫氫Elisa
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。