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產品分類：蛋白電泳

儲存條件：室溫,12個月

用途：蛋白質組學電泳

注意事項：IEF Anode buffer

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。

魔鬼弧菌磷化周期檢查控制蛋白質抗體Anti-CREB1 Antibody轉移抑制因子1(MTSS1)

黃桿菌屬磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRB1 Antibody轉位因子蛋白2(TSPO2)

大孢鏈霉菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CREB1 Antibody轉位因子蛋白(TSPO)

毛柄金錢菌(金針菇)磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CREB3L1 Antibody轉位蛋白(TSN)

酒酒球菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRH Antibody轉(TKT)

毛霉屬磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRK Antibody轉鐵蛋白受體2(TFR2)

釀酒酵母磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRK Antibody(PB0128)轉鐵蛋白受體(TFR)

中慢生華癸根瘤菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRLF2 Antibody轉鐵蛋白(TRF)

四脊曲霉磷化視網膜母瘤相關蛋白1抗體Anti-CRKL Antibody轉縮(TALDO1)

枯草芽孢桿菌磷化視網膜母瘤相關蛋白1抗體Anti-CRP Antibody轉錄因子20(TCF20)

肉色栓菌磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRP Antibody轉錄銜接因子3(TADA3)

西洼湖戈登氏菌磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRP Antibody轉錄銜接因子1(TADA1)

芽孢桿菌磷化視網膜母瘤相關蛋白1抗體Anti-CRP Antibody轉錄激活因子7(ATF7)

Escherichia磷化視網膜母瘤相關蛋白1抗體Anti-CRTC1 Antibody轉錄激活因子6(ATF6)

青霉屬磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRTC2 Antibody轉錄激活因子5(ATF5)

穿孔假單胞菌磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRTC1 Antibody轉錄激活因子4(ATF4)

條紋擬盤多毛孢Pestalotiopsis│virgatula 質量規格：>98%,BR

: F612資源名稱: 擬青霉 質量規格：0.98

乳房鏈球菌Streptococcus│uberis 質量規格：0.99
IEF陽極緩沖液Anopheles stephensi protein 1/FITC  熒光su標記按蚊IgG規格： 0.2ml

ANP/FITC  熒光su標記抗心鈉肽（心鈉su）IgG規格： 0.2ml

Anthrax/FITC  熒光su標記炭疽junIgG規格： 0.2ml

Anthrax/FITC  熒光su標記炭疽jun（采用活疫苗制備）IgG規格： 0.2ml

ANXA1(Annexin A1)/FITC  熒光su標記膜粘連蛋白A1IgG規格： 0.2ml

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5）   之后更換正常培養基培養即可。