詳細介紹
產品分類:蛋白電泳
儲存條件:4℃,避光,12個月
用途:配制丙烯酰胺凝膠(PAGE膠),包括SDS-PAGE膠等,可以用于蛋白或核酸的分離。
注意事項:主要由超純丙烯酰胺(acrylamide)、去離子水組成。
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
丙烯酰胺溶液 | 500ml | FS-R7495 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
蘇云金芽孢桿菌蘇云金亞種枯草溶菌轉化1抑制劑抗體Anti-CDK6 Antibody瘦受體(Leptin receptor)
類干酪乳桿菌枯草溶菌轉化1抑制劑抗體Anti-CDK8 Antibody瘦(LEP/Leptin)
黃綠鏈霉菌蛋白質磷2調節亞基5C/PP2A-B56-γ抗體Anti-CDK7 Antibody噬性趨化因子-2(Eotaxin-2)
金龜子綠僵菌蛋白質磷2調節亞基5D/PP2A-B56-δ抗體Anti-CDK7 Antibody噬性趨化因子(Eotaxin)
新城疫病磷化絲/蘇抗體Anti-CDKN1C Antibody嗜性粒趨化因子(Eotaxin)
變灰青霉ATP鈣離子轉運蛋白PMCA3抗體Anti-CDK9 Antibody(PB0565)嗜粒趨化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)
鍺栓孔菌 PUM1蛋白抗體Anti-CDKN1C Antibody生長因子(GH)
紅曲霉核糖核結合蛋白1抗體Anti-CDKN1B Antibody生長調節致癌基因α(GROα/CXCL1/MGSA)
細鏈格孢神經叢蛋白B2抗體Anti-CDO1 Antibody神經趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)
平滑假絲酵母磷化p53結合蛋白1抗體Anti-CDR2 Antibody前動力蛋白1(PROK1/EG-VEGF)
谷棒桿菌PDZ結構域蛋白GOPC抗體Anti-CEACAM5 Antibody凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)
異常漢遜酵母轉錄因子Pax6抗體Anti-CDR2 Antibody苗條受體(Leptin receptor)
北里胞菌多型性腺瘤基因樣蛋白1抗體Anti-CEACAM5 Antibody苗條(OB)
副干酪乳桿菌腫瘤抑制基因p53抗體Anti-CEBPA Antibody苗條(LEP)
產短桿菌蛋白激活受體4抗體Anti-CEBPA Antibody粒趨化蛋白2(GCP-2/CXCL6)
硬水黃桿菌原鈣粘蛋白β5抗體Anti-CEBPB Antibody(PB0119)粒巨噬集落激因子(GMCSF/CSF2)
豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌Actinobacillus│Pleuropneumoniae 質量規格:>98%,BR
有毒艾耳球蟲Eimeria│nocens 質量規格:>98%,BR
海桿菌Marinobacter│sp. 質量規格:>99%,BR
丙烯酰胺溶液Agtr1/AT1a/FITC 熒光su標記血管組織血管緊張suⅡ1型受體IgG規格: 0.2ml
AGER/Gold 金離子標記的晚期糖基化終末產物特異性受體規格: 0.2ml
Aryl Hydrocarbon Receptor/FITC 熒光su標記芳香烴受體IgG規格: 0.2ml
Aryl Hydrocarbon Receptor/FITC 熒光su標記芳香烴受體IgG規格: 0.2ml
AIF/FITC 熒光su標記AIFIgG規格: 0.2ml