詳細介紹
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
臺盼藍染色液 | 50ml | FS-R6662 |
產品分類:細胞染色
儲存條件:4℃,12個月
用途:又稱錐蟲藍染色液,用于細胞染色,細胞計數
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩定可靠。
金松雙黃(標準品) Benzyl acetateG蛋白偶聯受體18抗體包裝5g
金鐵鎖(標準品) Bensulfuron-methylG蛋白偶聯受體65抗體包裝100ml
金銀花(標準品) Benazolin-ethyl ester生長終止特異性同源盒基因抗體包裝500ml
金櫻根(標準品) 3,4-Benzopyrene谷受體2抗體包裝100g
金櫻子(標準品) (±)-1,3-Butanediol谷受體3抗體包裝25g
金盞銀盤(標準品) Butachlor solution谷受體4抗體包裝500g
筋骨草甾C Butachlor促代謝型谷受體1抗體包裝1g
錦燈籠(標準品) Butachlor solution甘受體α4抗體包裝250mg
京大戟(標準品) Butachlor solution生長分化因子8抗體包裝50mg
京平(標準品) Buturon磷化糖原合激-3β抗體包裝1g
京平甙(標準品) Bromopropylate solutionGlu-Glu tag抗體包裝25g
京平苷(標準品) Bromopropylate solution胰高血糖樣肽-2抗體包裝5g
荊芥(標準品) Bronopol甘受體alpha 1/2/3型抗體包裝250mg
荊芥穗(標準品) Benfluralin抑制型G蛋白α3抗體包裝25g
九里香(標準品) Benzo(k)fluoranthene促性腺激釋放激受體抗體包裝5g
腐皮鐮孢Fusarium│solani 質量規格:>98%,培養級趨化因子配體17試劑盒牛磺鵝去氧膽 ;Taurochenod
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格:>98%,BR趨化因子26試劑盒牛血清白蛋白;Bovine albumi
貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型Botryosphaeria│ribis Grossenb. & Duggar 質量規格:HPLC>98%,標準品趨化因子2試劑盒耐斯糖;Nystose
臺盼藍染色液Klf4 (Kruppel likefactor 4) 腸道內富含的Kruppel樣因子抗原規格: 0.5mg
phospho-KLF5/Krueppel-like factor 5 (pSer272) 磷suan化腸道內富含的Kruppel樣因子5抗原規格: 0.5mg
phospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5, Human, mo, rat, horse, bovine, rabbit, pig, dog 磷suan化腸道內富含的Kruppel樣因子5抗原規格: 0.5mg
LDH(Lactate Dehydrogenase) 乳suan脫氫mei抗原規格: 0.5mg
Leptin receptor(a、b、c、d) 瘦su受體抗原(長、中、短型)規格: 0.5mg
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。