詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規格供應,售后完善。
產品名稱 | 乙醛脫氫酶16家庭A1抗體 |
英文名稱 | ALDH16A1 |
規格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯)胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
蛋白質二硫鍵異構酶PDI英文名稱:Human protein disulfide isomerase, PDI
胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶CAD英文名稱:Human caspase activated deoxyribonuclease, CAD
γ谷氨酰半胱氨酸合成酶γ-ECS英文名稱:Humanγ-glutamyl systeine synthetase, γ-ECS
泛素激活酶E1/UBAE英文名稱:Human E1/ubiquitin-activating enzyme, E1/UBAE
胃蛋白酶PP英文名稱:Human Pepsin, PP
己糖激酶HK英文名稱:Human Hexokinase, HK
丙酮酸脫氫酶E1PDH E1英文名稱:Human pyruvate dehydrogenase-E1, PDH E1
糖原合成酶激酶GSK英文名稱:Human glycogen synthase kinase, GSK
胱天蛋白酶9Casp-9英文名稱:Human Caspase-9, Casp-9
胱天蛋白酶3Casp-3英文名稱:Human Caspase 3, Casp-3
中性粒細胞彈性蛋白酶NE英文名稱:Human neutrophil elastase, NE
碳酸酐酶2CA-2英文名稱:Human carbonic anhydrase 2, CA-2
解整合素樣金屬蛋白酶8ADAM8英文名稱:Human A Disintegrin And Metalloprotease 8, ADAM8
髓過氧化物酶MPO英文名稱:Human myeloperoxidase, MPO
顆粒酶BGzms-B英文名稱:Human granzymes B, Gzms-B
乙醛脫氫酶16家庭A1抗體Myrothecium verrucaria分離基物: 腐爛穿心蓮根提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 植物病源菌;膽紅素菌培養基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
暗色環紋炭團菌(斜面)種屬: Annulohypoxylon stygium提供形式: 試管斜面安全等級: 1模式菌株: no培養基: 綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件: 25℃,好氧
Bacillus subtilis分離基物: 畢拔穗提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抑制金黃色葡萄球菌培養基: CM0003生長條件: 35-37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Streptomyces sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 抗真菌;抗白色念珠菌培養基: CM0038生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結
Paecilomyces persicinus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產生頭孢菌素培養基: 14生長條件: 26℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Idiomarina sp.分離基物: 沉積物/深海表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 潛在石油烴類降解菌/生物活性物質篩選培養基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Microbacterium hominis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養基: 820生長條件: 29℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Bacillus clausii分離基物: 聚苯乙烯培養皿上5天后自然形成的生物膜提供形式: 斜面培養物模式菌株: no應用領域: potential antifouling 潛在的抗污損活性培養基: 467生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Planomicrobium chinense分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 分類、研究,可以用來農田土壤及環境修復微生物制劑。培養基: 0002生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;礦物油法