詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體 |
英文名稱 | AMN1 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存。抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
凋亡信號調(diào)節(jié)激酶IASK-1英文名稱:Human apoptosis signal regulating kinase 1, ASK-1
凋亡信號調(diào)節(jié)激酶IASK-1英文名稱:Human apoptosis signal regulating kinase 1, ASK-1
Bcl-2相關(guān)X蛋白BAX英文名稱:Human Bcl-2 associated X protein, Bax
轉(zhuǎn)移因子TF英文名稱:Human Transfer factor, TF
結(jié)腸癌抗原CCA英文名稱:Human Colon Cancer Antigen, CCA
c-myc癌基因產(chǎn)物c-myc英文名稱:Human c-myc Oncogene product, c-myc
腫瘤相關(guān)抗原TAA英文名稱:Human tumor-associated antigen, TAA
TGF-β誘導早期基因1TIEG1英文名稱:Human TGF-beta-inducible early response gene-1, TIEG1
腫瘤血管生長因子TAF英文名稱:Human tumor angiogenesis factors, TAF
細胞角蛋白20CK-20英文名稱:Human cytokeratin 20, CK-20
細胞角蛋白19CK-19英文名稱:Human cytokeratin 19, CK-19
細胞角蛋白18CK-18英文名稱:Human cytokeratin 18, CK-18
嗜鉻蛋白ACgA英文名稱:Human Chromogranin, CgA
視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制蛋白pRB英文名稱:Human retinoblastoma tumor suppressor protein, pRB
成熟促進因子MPF英文名稱:Human maturation promoting factor, MPF
細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.分離基物: 桉樹組織提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 30存儲條件: 定期移植法
Streptomyces kitasatoensis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)生Leucomycin柱晶白霉素培養(yǎng)基: CM0248生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
Candida tropicalis分離基物: 生物樣/木欖/樹皮提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 近海酵母培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法
Lentinula edodes (Berk.) Pegler分離基物: 楊樹提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25-27存儲條件: 定期移植法
Aspergillus niger提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 糖化酶菌。培養(yǎng)基: CM0015生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Pseudomonas chlororaphis subsp. aurantiaca (Nakhimovskaya) Pei分離基物: 根際土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 微生物肥料培養(yǎng)基: 141生長條件: 28存儲條件: 定期移植法
Penicillium sp.分離基物: 海底沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 可做抑真菌、抑腫瘤研究。培養(yǎng)基: 475生長條件: 18-25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法
分枝桿菌種屬: Mycobacterium Mycobacterium confluentis提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法
Saccharomyces rouxii提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 醬油酵母培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法